Nature.com ကိုလာရောက်လည်ပတ်သည့်အတွက် ကျေးဇူးတင်ပါသည်။သင်အသုံးပြုနေသောဘရောက်ဆာဗားရှင်းတွင် CSS ပံ့ပိုးမှုအကန့်အသတ်ရှိသည်။အကောင်းဆုံးအတွေ့အကြုံအတွက်၊ အပ်ဒိတ်လုပ်ထားသောဘရောက်ဆာ (သို့မဟုတ် Internet Explorer တွင် လိုက်ဖက်ညီသောမုဒ်ကိုပိတ်ပါ) ကိုအသုံးပြုရန် ကျွန်ုပ်တို့အကြံပြုအပ်ပါသည်။ဤအတောအတွင်း၊ ဆက်လက်ပံ့ပိုးမှုသေချာစေရန်၊ ပုံစံများနှင့် JavaScript မပါဘဲ ဝဘ်ဆိုက်ကို တင်ဆက်ပါမည်။
အဆုတ်အဆုတ်သို့ ကူးပြောင်းခြင်းသည် ကုထုံးအကျိုးသက်ရောက်မှု မရှိသောကြောင့် အဆုတ် cystic fibrosis ကုသမှုအတွက် မျိုးရိုးဗီဇပိုးများသည် conductive airways ဆီသို့ ပစ်မှတ်ထားရမည်ဖြစ်သည်။ဗိုင်းရပ်စ်ကူးစက်မှု၏ထိရောက်မှုသည် သယ်ဆောင်သူ၏နေထိုင်ချိန်နှင့် တိုက်ရိုက်သက်ဆိုင်သည်။သို့ရာတွင်၊ မျိုးဗီဇသယ်ဆောင်သူကဲ့သို့သော ပေးပို့အရည်များသည် ရှူရှိုက်စဉ်အတွင်း အယ်လ်ဗီလီထဲသို့ သဘာဝအတိုင်း ပျံ့နှံ့သွားပြီး မည်သည့်ပုံသဏ္ဍာန်၏ ကုထုံးအမှုန်အမွှားများကို မှိုသယ်ယူပို့ဆောင်ခြင်းဖြင့် လျင်မြန်စွာ ဖယ်ရှားပါသည်။အသက်ရှူလမ်းကြောင်းရှိ မျိုးဗီဇသယ်ဆောင်သူများ၏ နေထိုင်ချိန်ကို တိုးချဲ့ခြင်းသည် အရေးကြီးသော်လည်း အောင်မြင်ရန် ခက်ခဲသည်။အသက်ရှူလမ်းကြောင်း၏ မျက်နှာပြင်ဆီသို့ ဦးတည်နိုင်သည့် သယ်ဆောင်သူ-ပေါင်းစပ်သံလိုက်အမှုန်များသည် ဒေသဆိုင်ရာ ပစ်မှတ်ကို ပိုမိုကောင်းမွန်စေနိုင်သည်။vivo ပုံရိပ်ဖော်ခြင်းတွင် ပြဿနာများကြောင့်၊ အသုံးချသံလိုက်စက်ကွင်းတစ်ခုရှိနေခြင်းတွင် လေလမ်းကြောင်းမျက်နှာပြင်ပေါ်ရှိ သံလိုက်အမှုန်အမွှားလေးများ၏ အပြုအမူကို နားမလည်နိုင်ဖြစ်မိသည်။ဤလေ့လာမှု၏ ရည်ရွယ်ချက်မှာ မေ့ဆေးဆေးထားသော ကြွက်များ၏ လေပြွန်အတွင်း သံလိုက်အမှုန်များ ဆက်တိုက်ရွေ့လျားမှုကို မြင်ယောင်နိုင်စေရန် synchrotron ပုံရိပ်ကို အသုံးပြု၍ vivo အတွင်းရှိ အမှုန်အမွှားများနှင့် အစုလိုက်အပြုံလိုက်များ၏ လှုပ်ရှားမှုပုံစံများကို လေ့လာရန်အတွက် ဖြစ်သည်။ထို့နောက် သံလိုက်စက်ကွင်းတစ်ခုရှိ lentiviral magnetic particles များပေးပို့ခြင်းသည် ကြွက်လေပြွန်အတွင်း transduction ၏ထိရောက်မှုကို တိုးမြင့်စေခြင်းရှိမရှိကိုလည်း အကဲဖြတ်ခဲ့ပါသည်။Synchrotron X-ray ပုံရိပ်သည် vitro နှင့် vivo တို့တွင် လှုပ်နေသော သံလိုက်စက်ကွင်းများအတွင်း သံလိုက်အမှုန်များ၏ အပြုအမူကို ပြသသည်။သံလိုက်ဖြင့် သက်ရှိ လေလမ်းကြောင်း၏ မျက်နှာပြင်ကို အလွယ်တကူ ဆွဲငင်နိုင်ခြင်း မရှိသော်လည်း သယ်ယူပို့ဆောင်ရေး ကာလအတွင်း သံလိုက်စက်ကွင်းသည် အပြင်းထန်ဆုံးဖြစ်သည့် မြင်ကွင်းတွင် အနည်အနှစ်များကို စုစည်းထားသည်။သံလိုက်စက်ကွင်းတစ်ခုထံတွင် လီတီဗိုင်းရက်စ်သံလိုက်အမှုန်များကို ပို့ဆောင်သည့်အခါ ကူးပြောင်းခြင်းစွမ်းဆောင်ရည်ကိုလည်း ခြောက်ဆတိုးမြင့်စေသည်။ဤရလဒ်များနှင့်အတူ ပေါင်းစပ်ထားသော သံလိုက်အမှုန်အမွှားများနှင့် သံလိုက်စက်ကွင်းများသည် vivo ရှိ conductive airways ရှိ gene vector targeting နှင့် transduction အဆင့်များကို တိုးတက်ကောင်းမွန်လာစေရန်အတွက် အဖိုးတန်ချဉ်းကပ်မှုများ ဖြစ်နိုင်ကြောင်း အကြံပြုအပ်ပါသည်။
Cystic fibrosis (CF) သည် CF transmembrane conductance regulator (CFTR) ဟုခေါ်သော ဗီဇတစ်ခုတည်းတွင် ကွဲလွဲမှုများကြောင့် ဖြစ်ပေါ်လာခြင်းဖြစ်သည်။CFTR ပရိုတင်းသည် cystic fibrosis ၏ရောဂါဖြစ်ပွားမှု၏အဓိကနေရာဖြစ်သောလေလမ်းကြောင်းအပါအဝင်ခန္ဓာကိုယ်အနှံ့အပြားရှိ epithelial ဆဲလ်များစွာတွင်တည်ရှိသောအိုင်းယွန်းချန်နယ်တစ်ခုဖြစ်သည်။CFTR တွင် ချို့ယွင်းချက်များသည် ပုံမှန်မဟုတ်သော ရေပို့ဆောင်မှု၊ လေလမ်းကြောင်း မျက်နှာပြင်၏ ရေဓာတ်ခန်းခြောက်မှုနှင့် Airway surface fluid layer (ASL) အတိမ်အနက်ကို ကျဆင်းစေသည်။၎င်းသည် ရှူသွင်းထားသော အမှုန်အမွှားများနှင့် ရောဂါပိုးမွှားများ၏ အသက်ရှူလမ်းကြောင်းကို ရှင်းလင်းရန် mucociliary transport (MCT) စနစ်၏ စွမ်းရည်ကိုလည်း ထိခိုက်စေပါသည်။ကျွန်ုပ်တို့၏ရည်မှန်းချက်မှာ CFTR ဗီဇ၏မှန်ကန်သောမိတ္တူကိုပေးပို့ရန်နှင့် ASL၊ MCT နှင့် အဆုတ်ကျန်းမာရေးကိုတိုးတက်ကောင်းမွန်စေရန်နှင့် vivo1 တွင်ဤကန့်သတ်ချက်များကိုတိုင်းတာနိုင်သောနည်းပညာအသစ်များကိုဆက်လက်ဖန်တီးရန်ကျွန်ုပ်တို့၏ရည်မှန်းချက်မှာ lentiviral (LV) ဗီဇကုထုံးကိုဖန်တီးရန်ဖြစ်သည်။
LV vector များသည် cystic fibrosis မျိုးရိုးဗီဇကုထုံးအတွက် ထိပ်တန်းကိုယ်စားလှယ်လောင်းများထဲမှ တစ်ခုဖြစ်ပြီး၊ အဓိကအားဖြင့် ၎င်းတို့သည် ကုထုံးဗီဇကို အသက်ရှူလမ်းကြောင်းဆိုင်ရာ အခြေခံဆဲလ်များ (airway stem cells) အတွင်းသို့ အမြဲတမ်း ပေါင်းစည်းနိုင်သောကြောင့် ဖြစ်သည်။၎င်းတို့သည် cystic fibrosis နှင့်ဆက်စပ်သော လုပ်ဆောင်ချက်ရှိသော မျိုးရိုးဗီဇပြုပြင်ထားသော လေလမ်းကြောင်းမျက်နှာပြင်ဆဲလ်များကို ခွဲခြားခြင်းဖြင့် ပုံမှန်ရေဓာတ်နှင့် ချွဲရှင်းလင်းမှုကို ပြန်လည်ရရှိစေနိုင်သောကြောင့် အရေးကြီးပါသည်။LV vector များသည် conductive airways နှင့် CF တွင် အဆုတ်ပါဝင်မှုစသည့်နေရာဖြစ်သောကြောင့်၊အဆုတ်ထဲသို့ ပိုနက်သော vector ကို ပေးပို့ခြင်းသည် alveolar transduction ကို ဖြစ်ပေါ်စေနိုင်သော်လည်း ၎င်းသည် cystic fibrosis အတွက် ကုထုံးဆိုင်ရာ အကျိုးသက်ရောက်မှု မရှိပါ။သို့သော်၊ ကလေးမွေးဖွားပြီးနောက် 3,4 ရှူသွင်းလိုက်သောအခါ မျိုးရိုးဗီဇသယ်ဆောင်သူများကဲ့သို့သော အရည်များသည် alveoli အတွင်းသို့ သဘာဝအတိုင်း ရွှေ့ပြောင်းသွားပြီး ကုထုံးဆိုင်ရာအမှုန်အမွှားများကို MCTs မှ ခံတွင်းထဲသို့ လျင်မြန်စွာ ထုတ်လွှတ်ပါသည်။LV ကူးပြောင်းခြင်း၏ ထိရောက်မှုသည် ဆဲလ်လူလာစုပ်ယူမှုကို ခွင့်ပြုရန် ပစ်မှတ်ဆဲလ်များနှင့် နီးကပ်စွာတည်ရှိနေသည့်အချိန်ကြာချိန်နှင့် တိုက်ရိုက်ဆက်စပ်နေပြီး ပုံမှန်ဒေသတွင်းလေ၀င်ပေါက်မှ အလွယ်တကူ တိုတောင်းကာ ချွဲနှင့် MCT အမှုန်အမွှားများကို စုပ်ယူနိုင်စေပါသည်။cystic fibrosis အတွက်၊ လေလမ်းကြောင်းအတွင်းရှိ LV နေထိုင်ချိန်ကို ရှည်ကြာနိုင်မှုသည် ဤဧရိယာတွင် transduction အဆင့်မြင့်မားစွာရရှိရန် အရေးကြီးသော်လည်း ယခုအချိန်အထိ စိန်ခေါ်မှုဖြစ်သည်။
ဤအခက်အခဲကို ကျော်လွှားရန်အတွက် LV သံလိုက်အမှုန်များ (MPs) သည် ဖြည့်စွက်နည်းလမ်းနှစ်ခုဖြင့် ကူညီပေးနိုင်ကြောင်း ကျွန်ုပ်တို့ အဆိုပြုပါသည်။ပထမဦးစွာ၊ ၎င်းတို့ကို ပစ်မှတ်ထားရန် နှင့် မျိုးဗီဇသယ်ဆောင်သူအမှုန်များကို ပိုမိုကောင်းမွန်စေရန်အတွက် လေလမ်းကြောင်းမျက်နှာပြင်သို့ သံလိုက်ဖြင့် လမ်းညွှန်နိုင်သည်၊နှင့် ASL) ဆဲလ်အလွှာသို့ ရွေ့လျားခြင်း 6. MP များသည် ပဋိပစ္စည်း၊ ဓာတုကုထုံးဆေးဝါးများ သို့မဟုတ် ဆဲလ်အမြှေးပါးများနှင့် ချိတ်ဆက်ထားသော သို့မဟုတ် ၎င်းတို့၏ သက်ဆိုင်ရာ ဆဲလ်မျက်နှာပြင် receptors များနှင့် ချိတ်ဆက်ပြီး အကျိတ်နေရာများတွင် စုပုံလာသောအခါတွင် ပစ်မှတ်ထားသော ဆေးဝါးပို့ဆောင်ယာဉ်များအဖြစ် ကျယ်ကျယ်ပြန့်ပြန့်အသုံးပြုကြသည်။ တည်ငြိမ်လျှပ်စစ်ဓာတ်ရှိနေခြင်း။ကင်ဆာကုထုံးအတွက် သံလိုက်စက်ကွင်းများ 7. အခြားသော "အပူလွန်ကဲခြင်း" နည်းလမ်းများသည် တုန်ခါနေသော သံလိုက်စက်ကွင်းများနှင့် ထိတွေ့သောအခါ MP များကို အပူပေးခြင်းဖြင့် အကျိတ်ဆဲလ်များကို သတ်ပစ်ရန် ရည်ရွယ်ပါသည်။DNA ဆဲလ်များအတွင်းသို့ ကူးပြောင်းခြင်းကို မြှင့်တင်ရန်အတွက် သံလိုက်စက်ကွင်းကို ကူးပြောင်းခြင်းဆိုင်ရာ နိယာမကို ဗိုင်းရပ်စ်မဟုတ်သော ဗီဇဗက်တာအမြောက်အမြားကို အသုံးပြု၍ ဆဲလ်လိုင်းများ ကူးပြောင်းရခက်ခဲသော ဆဲလ်လိုင်းများအတွက် ဗိုင်းရပ်စ်မဟုတ်သော ဗိုင်းရပ်စ်မျိုးဗီဇအကွာအဝေးကို အသုံးပြုသည်။ ..တည်ငြိမ်သောသံလိုက်စက်ကွင်းတစ်ခုရှိနေချိန်တွင် LV MP in vitro ၏ဆဲလ်လိုင်းသို့ LV MP in vitro ပေးပို့ခြင်းဖြင့် LV magnetotransfection ၏ထိရောက်မှုအားတည်ဆောက်ခဲ့ပြီး LV vector တစ်ခုတည်းနှင့်နှိုင်းယှဉ်ပါက transduction ၏ထိရောက်မှု 186 ဆတိုးတက်ခဲ့သည်။LV MT ကို cystic fibrosis sputum10 ၏ရှေ့မှောက်တွင်အချက် 20 ဖြင့်သံလိုက်ဓာတ်လွှဲပြောင်းခြင်းသည်လေ-အရည်ကြားခံယဉ်ကျေးမှုတွင် LV ကူးပြောင်းမှုကိုတိုးပွားစေသည့် cystic fibrosis ၏ in vitro မော်ဒယ်ကိုလည်းအသုံးပြုထားသည်။သို့သော်၊ vivo အင်္ဂါအစိတ်အပိုင်း magnetotransfection သည် အာရုံစိုက်မှုအနည်းငယ်သာရရှိခဲ့ပြီး အထူးသဖြင့် အဆုတ် 16,17 တွင်သာ တိရစ္ဆာန်လေ့လာမှုအနည်းငယ်တွင်သာ အကဲဖြတ်ထားပါသည်။သို့သော်၊ cystic fibrosis ရှိ အဆုတ်ကုထုံးတွင် သံလိုက်ဓာတ် ကူးပြောင်းခြင်း၏ ဖြစ်နိုင်ခြေများမှာ ရှင်းပါသည်။တန် et al ။(2020) တွင် "သံလိုက်နာနိုအမှုန်များ ထိရောက်သော အဆုတ်ပေးပို့ခြင်းဆိုင်ရာ မှန်ကန်သောလေ့လာမှုသည် cystic fibrosis ရှိသောလူနာများအတွက် CFTR ရှူသွင်းခြင်းနည်းဗျူဟာများအတွက် အနာဂတ်တွင် လမ်းခင်းပေးလိမ့်မည်" 6။
အသုံးချသံလိုက်စက်ကွင်းတစ်ခုရှိနေခြင်းတွင် အသက်ရှူလမ်းကြောင်း၏မျက်နှာပြင်ပေါ်ရှိ သံလိုက်အမှုန်အမွှားငယ်များ၏ အပြုအမူကို မြင်ယောင်ပြီး လေ့လာရန်ခက်ခဲသောကြောင့် ၎င်းတို့ကို နားမလည်နိုင်ပေ။အခြားလေ့လာမှုများတွင်၊ ကျွန်ုပ်တို့သည် ASL18 အတိမ်အနက်နှင့် MCT19 အပြုအမူရှိ ဓာတ်ငွေ့ချန်နယ်မျက်နှာပြင်ရှိ ရေဓါတ်ကို တိုက်ရိုက်တိုင်းတာရန်အတွက် Vivo တွင် မထိုးဖောက်နိုင်သောပုံရိပ်နှင့် မိနစ်အရေအတွက်ကို တိုင်းတာရန်အတွက် Synchrotron Propagation Based Phase Contrast X-Ray Imaging (PB-PCXI) နည်းလမ်းကို တီထွင်ထားပါသည်။ စောစီးစွာ ကုသမှု ထိရောက်မှု ညွှန်ပြချက်အဖြစ် အသုံးပြုသည်။ထို့အပြင် ကျွန်ုပ်တို့၏ MCT အမှတ်ပေးနည်းလမ်းသည် PB-PCXI21 ဖြင့်မြင်ရသော MCT အမှတ်အသားများအဖြစ် အလူမီနာ သို့မဟုတ် မြင့်မားသောအလင်းယိုင်အညွှန်းမှန်ဖြင့်ဖွဲ့စည်းထားသော 10-35 µm အချင်းအမှုန်များကို အသုံးပြုသည်။နည်းလမ်းနှစ်ခုစလုံးသည် MP များအပါအဝင် အမှုန်အမွှားအမျိုးအစားများစွာကို ပုံရိပ်ဖော်ရန်အတွက် သင့်လျော်ပါသည်။
မြင့်မားသော spatial နှင့် temporal resolution ကြောင့်၊ ကျွန်ုပ်တို့၏ PB-PCXI-based ASL နှင့် MCT စစ်ဆေးမှုများသည် vivo ရှိ တစ်ခုတည်းနှင့် အစုလိုက်အမှုန်များ၏ ဒိုင်နမစ်နှင့် အပြုအမူပုံစံများကို လေ့လာရန် ကောင်းစွာသင့်လျော်ပါသည်။ဤနေရာတွင်ကျွန်ုပ်တို့အသုံးပြုသောချဉ်းကပ်မှုသည်ကျွန်ုပ်တို့၏လေ့လာမှုများပေါ်တွင်အခြေခံသည် SPring-8 BL20B2 beamline ကိုအသုံးပြုပြီးကျွန်ုပ်တို့၏လေ့လာမှုများပေါ်မူတည်ပြီး dummy vector ကိုထိုးသွင်းပြီးနောက်ကျွန်ုပ်တို့၏နှာခေါင်းနှင့်အဆုတ်လေလမ်းကြောင်းထဲသို့အရည်များလှုပ်ရှားမှုကိုကျွန်ုပ်တို့မြင်သာအောင်မြင်နိုင်သည် ကျွန်ုပ်တို့၏ဗီဇထဲတွင်သယ်ဆောင်ဆေးပမာဏ 3.4 ဖြင့် တိရစ္ဆာန်လေ့လာမှုများ။
ဤလေ့လာမှု၏ရည်ရွယ်ချက်မှာ PB-PCXI synchrotron ကိုအသုံးပြုပြီး ကြွက်များ၏လေပြွန်အတွင်း လွှတ်တော်အမတ်များ၏ vivo လှုပ်ရှားမှုများကိုမြင်ယောင်နိုင်ရန်ဖြစ်သည်။ဤ PB-PCXI ပုံရိပ်ဖော်လေ့လာမှုများသည် MP စီးရီးများ၊ သံလိုက်စက်ကွင်းအားနှင့် MP လှုပ်ရှားမှုအပေါ် ၎င်းတို့၏အကျိုးသက်ရောက်မှုကို ဆုံးဖြတ်ရန် တည်နေရာကို စမ်းသပ်ရန် ဒီဇိုင်းထုတ်ထားသည်။ပြင်ပသံလိုက်စက်ကွင်းတစ်ခုသည် ပေးပို့ထားသော MF ကို ဆက်နေရန် သို့မဟုတ် ပစ်မှတ်နေရာကို ရွှေ့ရန် ကူညီပေးမည်ဟု ကျွန်ုပ်တို့ ယူဆပါသည်။ဤလေ့လာမှုများသည် အစစ်ခံပြီးနောက် လေပြွန်အတွင်း ကျန်ရှိသည့် အမှုန်ပမာဏကို အမြင့်ဆုံးဖြစ်စေသော သံလိုက်ဖွဲ့စည်းပုံများကို ဆုံးဖြတ်နိုင်စေပါသည်။ဒုတိယစီးရီးလေ့လာမှုတစ်ခုတွင်၊ ကျွန်ုပ်တို့သည် vivo မှ LV-MPs များကို rat airways သို့ ပေးပို့ခြင်းမှ ထွက်ပေါ်လာသော transduction ပုံစံကို သရုပ်ပြသရန် ဤအကောင်းဆုံးပုံစံကို အသုံးပြုရန် ရည်ရွယ်ပြီး၊ ရလဒ်အနေဖြင့် LV-MPs များကို လေလမ်းကြောင်းပစ်မှတ်ထားရှိသည့်အခြေအနေတွင် ပို့ဆောင်ပေးမည်ဟူသော ယူဆချက်ဖြင့်၊ LV transduction စွမ်းဆောင်ရည်ကို တိုးမြှင့်ပေးသည်။.
တိရစ္ဆာန်လေ့လာမှုအားလုံးကို Adelaide တက္ကသိုလ် (M-2019-060 နှင့် M-2020-022) နှင့် SPring-8 Synchrotron တိရစ္ဆာန်ကျင့်ဝတ်ကော်မတီတို့မှ အတည်ပြုထားသော ပရိုတိုကောများနှင့်အညီ ပြုလုပ်ခဲ့ပါသည်။ARRIVE ၏ အကြံပြုချက်များနှင့်အညီ စမ်းသပ်မှုများကို ပြုလုပ်ခဲ့ပါသည်။
X-ray ပုံအားလုံးကို ဂျပန်နိုင်ငံရှိ SPring-8 synchrotron တွင် BL20XU beamline တွင် ယခင်ဖော်ပြထားသော 21,22 နှင့် ဆင်တူသော စနစ်ထည့်သွင်းမှုကို အသုံးပြု၍ ရိုက်ကူးခဲ့သည်။အတိုချုပ်အားဖြင့်၊ စမ်းသပ်သေတ္တာသည် synchrotron သိုလှောင်မှုကွင်းမှ 245 မီတာအကွာတွင်တည်ရှိသည်။နမူနာမှ ထောက်လှမ်းသည့် အကွာအဝေးကို 0.6 မီတာ အမှုန်အမွှားပုံရိပ်ဖော်ခြင်းလေ့လာမှုအတွက် 0.3 မီတာကို အဆင့်ဆန့်ကျင်ဘက်သက်ရောက်မှုများဖန်တီးရန်အတွက် vivo ပုံရိပ်လေ့လာမှုများတွင် အသုံးပြုသည်။25 keV စွမ်းအင်ရှိသော monochromatic အလင်းတန်းတစ်ခုကို အသုံးပြုခဲ့သည်။ပုံများကို sCMOS detector နှင့် ပေါင်းစပ်ထားသော မြင့်မားသော ရုပ်ထွက် X-ray transducer (SPring-8 BM3) ကို အသုံးပြု၍ ရရှိခဲ့သည်။ထို့နောက် transducer သည် X-rays များကို မြင်နိုင်သောအလင်းအဖြစ်သို့ 10 µm အထူ Scintillator (Gd3Al2Ga3O12) ကို အသုံးပြု၍ ×10 (NA 0.3) microscope ရည်ရွယ်ချက်ကို အသုံးပြု၍ sCMOS အာရုံခံကိရိယာထံသို့ ညွှန်ကြားသည်။sCMOS detector သည် Orca-Flash4.0 (Hamamatsu Photonics, Japan) တစ်ခုဖြစ်ပြီး array size 2048 × 2048 pixels နှင့် raw pixel size 6.5 × 6.5 µm ဖြစ်သည်။ဤဆက်တင်သည် ထိရောက်သော isotropic pixel အရွယ်အစား 0.51 µm နှင့် ခန့်မှန်းခြေအားဖြင့် 1.1 mm × 1.1 mm မြင်ကွင်းကို ပေးပါသည်။ထိတွေ့မှုကြာချိန် 100 ms သည် အသက်ရှူလမ်းကြောင်းအတွင်းနှင့် အပြင်ဘက်ရှိ သံလိုက်အမှုန်များ၏ signal-to-noise အချိုးကို တိုးမြှင့်ရန် ရွေးချယ်ထားသည်။vivo လေ့လာမှုများတွင် ထိတွေ့မှုကြားရှိ X-ray beam ကို ပိတ်ဆို့ခြင်းဖြင့် ဓာတ်ရောင်ခြည်ပမာဏကို ကန့်သတ်ရန် အမြန် X-ray shutter တစ်ခုကို X-ray လမ်းကြောင်းတွင် ထားရှိခဲ့ပါသည်။
LV မီဒီယာကို SPring-8 PB-PCXI ပုံရိပ်ဖော်လေ့လာမှုများတွင် အသုံးမပြုခဲ့သဖြင့် BL20XU ပုံရိပ်ဖော်ခန်းသည် Biosafety Level 2 ထောက်ခံချက်မဟုတ်သောကြောင့်ဖြစ်သည်။ယင်းအစား၊ ကျွန်ုပ်တို့သည် အရွယ်အစား၊ ပစ္စည်း၊ သံပြင်းအား နှင့် အပလီကေးရှင်းများ ပါဝင်သော စီးပွားဖြစ်ရောင်းချသူ နှစ်ဦးထံမှ ကောင်းမွန်သောသွင်ပြင်လက္ခဏာရှိသော လွှတ်တော်အမတ်များကို ရွေးချယ်ထားသည် — ပထမဦးစွာ သံလိုက်စက်ကွင်းများသည် ဖန်သွေးကြောမျှင်များအတွင်း လွှတ်တော်အမတ်များ၏ ရွေ့လျားမှုကို မည်ကဲ့သို့ အကျိုးသက်ရောက်သည်ကို နားလည်စေရန်အတွက်၊ ထို့နောက်တွင်၊ အသက်ရှင်သောလေလမ်းကြောင်း။မျက်နှာပြင်။MP ၏အရွယ်အစားသည် 0.25 မှ 18 µm ကွာခြားပြီး အမျိုးမျိုးသောပစ္စည်းများဖြင့်ပြုလုပ်ထားသည် (ဇယား 1 ကိုကြည့်ပါ) သို့သော် MP အတွင်းရှိသံလိုက်အမှုန်များ၏အရွယ်အစားအပါအဝင်နမူနာတစ်ခုစီ၏ဖွဲ့စည်းပုံကိုမသိရပါ။ကျွန်ုပ်တို့၏ကျယ်ပြန့်သော MCT လေ့လာမှုများ 19၊ 20၊ 21၊ 23၊ 24 ကိုအခြေခံ၍ 5 µm အောက် MP များကို tracheal airway မျက်နှာပြင်ပေါ်တွင်မြင်နိုင်သည်၊ ဥပမာ၊ MP ၏လှုပ်ရှားမှုကိုပိုမိုမြင်နိုင်စေရန်ဆက်တိုက်ဘောင်များကိုနုတ်ခြင်းဖြင့်ကျွန်ုပ်တို့မျှော်လင့်ထားသည်။0.25 µm ၏ တစ်ခုတည်းသော MP သည် ပုံရိပ်ဖော်ကိရိယာ၏ ကြည်လင်ပြတ်သားမှုထက် သေးငယ်သော်လည်း PB-PCXI သည် ၎င်းတို့၏ ထုထည်ဆန့်ကျင်ဘက်ဖြစ်ပြီး အပ်နှံပြီးနောက် ၎င်းတို့ထည့်ထားသည့် မျက်နှာပြင်အရည်များ၏ ရွေ့လျားမှုကို သိရှိနိုင်မည်ဖြစ်သည်။
ဇယားရှိ လွှတ်တော်အမတ်တစ်ဦးစီအတွက် နမူနာများ။1 ကို 20 μl ဖန်သားမျှင်သွေးကြောမျှင်များ (Drummond Microcaps, PA, USA) အတွင်း အချင်း 0.63 မီလီမီတာဖြင့် ပြင်ဆင်ထားပါသည်။CombiMag အမှုန်များကို ထုတ်လုပ်သူ၏ မူပိုင်အရည်တွင် ရနိုင်သော်လည်း Corpuscular particles များကို ရေတွင်ရနိုင်သည်။ပြွန်တစ်ခုစီသည် အရည်တစ်ဝက် (ခန့်မှန်းခြေအားဖြင့် 11 µl) နှင့် ပြည့်နေပြီး နမူနာကိုင်ဆောင်သူ (ပုံ 1 ကိုကြည့်ပါ)။ဖန်သားမျှင်သွေးကြောများကို ပုံရိပ်ဖော်ခန်းအတွင်း စင်မြင့်ပေါ်တွင် အလျားလိုက် ထားရှိကာ အရည်၏ အစွန်းများတွင် နေရာယူထားသည်။ရှားပါးမြေကြီး၊ နီအိုဒီယမ်၊ သံနှင့် ဘိုရွန် (NdFeB) (N35၊ ကြောင်နံပါတ် LM1652၊ Jaycar Electronics၊ Australia) မှ ရှားပါးမြေကြီး၊ နီအိုဒီယမ်၊ သံလိုက်ဖြင့်ပြုလုပ်ထားသည့် 19 mm (အရှည် 28 မီလီမီတာ) နီကယ်-ရှဲလ်သံလိုက်အား တင်ဆက်နေစဉ်အတွင်း သင်၏ အနေအထားကို အဝေးမှ ပြောင်းလဲခြင်း အောင်မြင်ရန် သီးခြား လွှဲပြောင်းဇယား။နမူနာအထက် 30 မီလီမီတာ အကွာအဝေးတွင် သံလိုက်အား ဓာတ်မှန်ရိုက်ခြင်း စတင်ပြီး ပုံရိပ်များကို တစ်စက္ကန့်လျှင် ဖရိမ် 4 ဘောင်ဖြင့် ရရှိသောအခါတွင် စတင်သည်။ပုံရိပ်ဖော်နေစဉ်အတွင်း သံလိုက်အား ဖန်သားမျှင်ပိုက် (၁ မီလီမီတာခန့်အကွာအဝေး) နှင့် နီးကပ်စွာယူဆောင်လာပြီး ကွင်းပြင်၏ ကြံ့ခိုင်မှုနှင့် အနေအထား၏အကျိုးသက်ရောက်မှုကို အကဲဖြတ်ရန် ပြွန်တစ်လျှောက်သို့ ရွေ့လျားခဲ့သည်။
xyနမူနာကို ဘာသာပြန်သည့်အဆင့်တွင် ဖန်သားသွေးကြောမျှင်များတွင် MPနမူနာများပါရှိသော ဗီရိုပုံရိပ်ဖော်ခြင်း စနစ်ထည့်သွင်းခြင်း။X-ray အလင်းတန်း၏လမ်းကြောင်းကို အနီရောင်အစက်ဖြင့် အမှတ်အသားပြုထားသည်။
MPs များ၏ in vitro မြင်နိုင်စွမ်းကို တည်ထောင်ပြီးသည်နှင့် ၎င်းတို့အနက်မှ အပိုင်းခွဲတစ်ခုကို vivo တွင် တောရိုင်းအမျိုးစား အမျိုးသမီး Wistar albino ကြွက်များ (~12 ပတ်၊ ~200 ဂရမ်) တွင် စမ်းသပ်ခဲ့သည်။Medetomidine 0.24 mg/kg (Domitor®, Zenoaq, Japan), midazolam 3.2 mg/kg (Dormicum®, Astellas Pharma, Japan) နှင့် butorphanol 4 mg/kg (Vetorphale®, Meiji Seika)။ကြွက်များကို သားအိမ်တွင်းထိုးဆေးဖြင့် Pharma (Japan) ဆေးရည်ဖြင့် မေ့ဆေးပေးသည်။မေ့ဆေးပေးပြီးနောက် ၎င်းတို့သည် လေပြွန်တစ်ဝိုက်ရှိ သားမွေးများကို ဖယ်ရှားကာ endotracheal tube (ET; 16 Ga intravenous cannula, Terumo BCT) ဖြင့် ပုံရိပ်ဖော်ခြင်းအတွက် ပြင်ဆင်ပြီး အပူအိတ်တစ်လုံးပါရှိသော စိတ်ကြိုက်ပြုလုပ်ထားသော ပုံရိပ်ဖော်ပန်းကန်ပြားတစ်ခုပေါ်တွင် ပက်လက်အနေအထားဖြင့် ၎င်းတို့ကို လှုပ်ရှားစေပါသည်။ ခန္ဓာကိုယ်အပူချိန်ကိုထိန်းထားရန်။22. ထို့နောက် ပုံရိပ်ဖော်ပန်းကန်အား ပုံ 2a တွင်ပြထားသည့်အတိုင်း လေပြွန်ကို အလျားလိုက် ချိန်ညှိရန် ပုံ 2a တွင် ပုံ 2a တွင် ပုံသေတ္တာအတွင်းရှိ နမူနာအဆင့်နှင့် တွဲထားသည်။
(က) SPring-8 ပုံရိပ်ဖော်ယူနစ်ရှိ vivo ပုံရိပ်ဖော်ခြင်းစနစ်တွင်၊ အနီရောင်အစက်ဖြင့် အမှတ်အသားပြုထားသော X-ray အလင်းလမ်းကြောင်း။(ခ၊ ဂ) Tracheal magnet localization ကို ပေါင်းစပ်တပ်ဆင်ထားသော IP ကင်မရာနှစ်လုံးကို အသုံးပြု၍ အဝေးမှ လုပ်ဆောင်ခဲ့သည်။ဖန်သားပြင်ပေါ်ရှိ ပုံ၏ဘယ်ဘက်ခြမ်းတွင်၊ ဦးခေါင်းကိုကိုင်ထားသည့် ဝါယာကြိုးဝိုင်းနှင့် ET tube အတွင်းတွင် တပ်ဆင်ထားသည့် ပေးပို့မှု cannula ကို သင်တွေ့နိုင်သည်။
100 µl ဖန်ပြွန်ကို အသုံးပြု၍ အဝေးထိန်းဆေးထိုးပန့်စနစ် (UMP2၊ World Precision Instruments, Sarasota, FL) ကို 30 Ga အပ်တစ်ချောင်းကို အသုံးပြု၍ PE10 tubing (0.61 mm OD၊ 0.28 mm ID) နှင့် ချိတ်ဆက်ထားသည်။endotracheal tube ကိုထည့်သွင်းသောအခါအစွန်အဖျားသည် trachea တွင်မှန်ကန်သောအနေအထားရှိစေရန်ပြွန်ကိုမှတ်သားပါ။မိုက်ခရိုပန့်ကို အသုံးပြု၍ ဆေးထိုးပလပ်ဂါကို ဖယ်ရှားပြီး ပေးပို့ရန် MP နမူနာတွင် ပြွန်ထိပ်ကို နှစ်မြှုပ်ထားသည်။ထို့နောက် တင်ဆောင်ထားသော ပို့ဆောင်မှုပြွန်ကို endotracheal tube ထဲသို့ ထည့်သွင်းပြီး ကျွန်ုပ်တို့ မျှော်လင့်ထားသည့် သံလိုက်စက်ကွင်း၏ အပြင်းထန်ဆုံး အစိတ်အပိုင်းတွင် ထိပ်ဖျားကို ချထားပါသည်။ကျွန်ုပ်တို့၏ Arduino-based Timing Box နှင့် ချိတ်ဆက်ထားသော အသက်ရှူကိရိယာကို အသုံးပြု၍ ရုပ်ပုံရယူခြင်းကို ထိန်းချုပ်ထားပြီး အချက်ပြများ (ဥပမာ၊ အပူချိန်၊ အသက်ရှူမှု၊ ရှပ်တာအဖွင့်/အပိတ်) တို့ကို Powerlab နှင့် LabChart (AD Instruments၊ Sydney၊ Australia) သုံးပြီး မှတ်တမ်းတင်ထားပါသည်။ 22 ပုံရိပ်ဖော်ခြင်း အိမ်ရာကို မရနိုင်သောအခါ၊ IP ကင်မရာနှစ်လုံး (Panasonic BB-SC382) သည် တစ်ခုနှင့်တစ်ခု ခန့်မှန်းခြေအားဖြင့် 90° တွင် နေရာချထားပြီး ပုံရိပ်ဖော်နေစဉ်အတွင်း လေပြွန်နှင့်ဆက်စပ်သော သံလိုက်အနေအထားကို ထိန်းချုပ်ရန်အတွက် အသုံးပြုသည် (ပုံ 2b၊ ဂ)။ရွေ့လျားမှုဆိုင်ရာ ပစ္စည်းများကို လျှော့ချရန်၊ အသက်ရှူလမ်းကြောင်းဆိုင်ရာ ကုန်းပြင်မြင့်အတွင်း အသက်ရှူနှုန်း တစ်ပုံမှ ရရှိခဲ့သည်။
သံလိုက်အား ရုပ်ပုံကိုယ်ထည်၏ အပြင်ဘက်တွင် အဝေးမှနေ၍ ဒုတိယအဆင့်တွင် ချိတ်ထားသည်။သံလိုက်၏ အမျိုးမျိုးသော အနေအထားနှင့် ပုံစံများကို စမ်းသပ်ခဲ့သည်၊ အပါအဝင်- လေပြွန်အထက် 30° ထောင့်တွင် ထားရှိခြင်း (ဖွဲ့စည်းပုံများကို ပုံ 2a နှင့် 3a တွင် ပြထားသည်)။တိရိစ္ဆာန်၏အထက်တွင် သံလိုက်တစ်ခုနှင့် အခြားတစ်ခုသည် ဆွဲဆောင်ရန်အတွက် ထမ်းဘိုးများနှင့်အတူ (ပုံ 3b)။တိရစ္ဆာန်အထက် သံလိုက်တစ်ခုနှင့် အောက်တစ်ခု၊ အားပြန်ထုတ်ရန် သတ်မှတ်ထားသော ဝင်ရိုးစွန်းများ (ပုံ 3c)၊ နှင့် အပေါ်မှ သံလိုက်တစ်ခုနှင့် လေပြွန်နှင့် ထောင့်မှန် (ပုံ 3d)။တိရစ္ဆာန်နှင့် သံလိုက်ကို တပ်ဆင်ပြီး စမ်းသပ်မှုအောက်တွင် MP ကို ​​ဆေးပြွန်ပန့်ထဲသို့ တင်ပြီးနောက်၊ ပုံများရယူပြီးနောက် 4 µl/sec နှုန်းဖြင့် 50 µl ပမာဏကို ပေးပို့ပါ။ထို့နောက် ပုံများကို ဆက်လက်ရယူနေစဉ်တွင် သံလိုက်အား လေပြွန်တစ်လျှောက် သို့မဟုတ် လေပြွန်တစ်လျှောက် အပြန်ပြန်အလှန်လှန် ရွေ့လျားသည်။
vivo ပုံရိပ်ဖော်ခြင်းအတွက် သံလိုက်ဖွဲ့စည်းမှုပုံစံ (က) ခန့်မှန်းခြေအားဖြင့် 30° ထောင့်ရှိ လေပြွန်အထက် သံလိုက်တစ်ခု၊ (ခ) ဆွဲဆောင်မှုအတွက် စီစဉ်ထားသော သံလိုက်နှစ်ခု၊ (ဂ) တွန်းလှန်ရန်အတွက် စီစဉ်ထားသော သံလိုက်နှစ်ခု၊ (ဃ) အပေါ်မှ သံလိုက်တစ်ခုနှင့် တစ်ဖက်နှင့်တစ်ဖက်၊ လေပြွန်။အကဲခတ်သူသည် ပါးစပ်မှ လေပြွန်မှတစ်ဆင့် အဆုတ်ဆီသို့ ငုံ့ကြည့်ကာ X-ray ရောင်ခြည်သည် ကြွက်၏ ဘယ်ဘက်ခြမ်းကို ဖြတ်သွားကာ ညာဘက်ခြမ်းမှ ထွက်သွားသည်။သံလိုက်အား လေပြွန်၏ အရှည်တစ်လျှောက် သို့မဟုတ် လေပြွန်အထက် ဘယ်ညာသို့ X-ray အလင်းတန်း၏ ဦးတည်ရာသို့ ရွှေ့သည်။
အသက်ရှုခြင်းနှင့် နှလုံးခုန်နှုန်း ရောနှောခြင်းမရှိပါက လေလမ်းကြောင်းအတွင်းရှိ အမှုန်အမွှားများ၏ မြင်နိုင်စွမ်းနှင့် အပြုအမူတို့ကို ဆုံးဖြတ်ရန် ကြိုးပမ်းခဲ့သည်။ထို့ကြောင့်၊ ပုံရိပ်ဖော်ကာလ၏အဆုံးတွင် pentobarbital အလွန်အကျွံသုံးစွဲမှုကြောင့် တိရစ္ဆာန်များကို လူသားဆန်စွာ သုတ်သင်ရှင်းလင်းခြင်း (Somnopentyl, Pitman-Moore, Washington Crossing, USA; ~65 mg/kg ip)။အချို့သော တိရစ္ဆာန်များကို ပုံရိပ်ဖော်သည့် ပလပ်ဖောင်းပေါ်တွင် ထားခဲ့ပြီး အသက်ရှူနှင့် နှလုံးခုန်သံများ ရပ်တန့်ပြီးနောက်၊ ပုံရိပ်ဖော်ခြင်းလုပ်ငန်းစဉ်ကို ထပ်ခါတလဲလဲ ပြုလုပ်ခဲ့ပြီး အသက်ရှူလမ်းကြောင်း မျက်နှာပြင်တွင် MP မတွေ့ပါက MP ၏ နောက်ထပ်ဆေးပမာဏကို ထပ်လောင်းထည့်ပါသည်။
ထွက်ပေါ်လာသောပုံများကို MATLAB (R2020a၊ The Mathworks) တွင် ရေးသားထားသော စိတ်ကြိုက် ဇာတ်ညွှန်းကို အသုံးပြု၍ ရရှိလာသော ပုံများကို ပြားချပ်ချပ်နှင့် အမှောင်ကွက်လပ်အတွက် ပြုပြင်ပြီးနောက် ရုပ်ရှင် (တစ်စက္ကန့်လျှင် ဖရိမ် 20၊ 15-25 × ပုံမှန်အမြန်နှုန်း) တွင် စုစည်းထားသည်။
LV gene vector ပေးပို့ခြင်းဆိုင်ရာ လေ့လာမှုအားလုံးကို University of Adelaide Laboratory Animal Research Center တွင် ပြုလုပ်ခဲ့ပြီး SPring-8 စမ်းသပ်မှု၏ ရလဒ်များကို အသုံးပြုကာ သံလိုက်စက်ကွင်းအတွင်း LV-MP ပေးပို့ခြင်းကို အကဲဖြတ်ရန်အတွက် vivo တွင် မျိုးဗီဇလွှဲပြောင်းမှုကို မြှင့်တင်ပေးနိုင်ခြင်း ရှိ၊မရှိ အကဲဖြတ်ရန် ရည်ရွယ်သည်။ .MF နှင့် သံလိုက်စက်ကွင်း၏ အကျိုးသက်ရောက်မှုများကို အကဲဖြတ်ရန် တိရစ္ဆာန်အုပ်စုနှစ်စုကို ကုသခဲ့သည်- အုပ်စုတစ်စုကို သံလိုက်နေရာချထားခြင်းဖြင့် LV MF ဖြင့် ထိုးခဲ့ပြီး ကျန်အုပ်စုကို သံလိုက်မပါဘဲ LV MF ဖြင့် ထိန်းချုပ်သည့်အုပ်စုဖြင့် ထိုးခဲ့သည်။
LV gene vector များကို ယခင်က ဖော်ပြထားသော နည်းလမ်းများ 25၊ 26 ကို အသုံးပြု၍ ထုတ်လုပ်ထားပါသည်။LacZ vector သည် MPSV constitutive promoter (LV-LacZ) မှ မောင်းနှင်သော နျူကလီးယားဒေသခံ beta-galactosidase ဗီဇကို ဖော်ပြပြီး အဆုတ်တစ်သျှူးများ၏ မျက်နှာစာများနှင့် အပိုင်းများတွင် အပြာရောင်တုံ့ပြန်မှုထုတ်ကုန်ကို ထုတ်လုပ်ပေးပါသည်။TU/ml တွင် titer တွက်ချက်ရန် hemocytometer ကို အသုံးပြု၍ LacZ-positive ဆဲလ်အရေအတွက်ကို ကိုယ်တိုင်ရေတွက်ခြင်းဖြင့် titration ကို ဆဲလ်ယဉ်ကျေးမှုများတွင် လုပ်ဆောင်ခဲ့သည်။သယ်ဆောင်သူများသည် -80 ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်တွင် သိမ်းဆည်းထားပြီး အသုံးမပြုမီ ဖျော်ထားပြီး 1:1 ရောစပ်ပြီး ပို့ဆောင်ခြင်းမပြုမီ အနည်းဆုံး မိနစ် 30 ကြိုတင်ရေခဲပေါ်တွင် ပေါက်ပွားခြင်းဖြင့် CombiMag နှင့် ချည်နှောင်ထားသည်။
ပုံမှန် Sprague Dawley ကြွက်များ (n = 3/group၊ ~2-3 ထုံဆေး ip ၏ 0.4mg/kg medetomidine (Domitor, Ilium, Australia) နှင့် 60mg/kg ketamine (Ilium, Australia) အသက် 1 လတွင်) ip ) 16 Ga အကြောသေတ္တာဖြင့် ထိုးခြင်းနှင့် ခွဲစိတ်ခြင်းမဟုတ်သော ပါးစပ်မှ ဘူးခွံများ။tracheal airway tissue သည် LV transduction ရရှိကြောင်း သေချာစေရန်၊ tracheal airway မျက်နှာပြင်ကို ဝါယာကြိုးတောင်း (N-Circle၊ tip မပါဘဲ nitinol stone extractor NTSE-022115) -UDH ၊ Cook Medical, USA) 30 p28 ။ထို့နောက် biosafety ကက်ဘိနက်အတွင်းနှောင့်ယှက်ပြီးနောက် 10 မိနစ်ခန့်အကြာတွင် LV-MP ၏ tracheal စီမံခန့်ခွဲမှုကိုလုပ်ဆောင်ခဲ့သည်။
ဤစမ်းသပ်မှုတွင် အသုံးပြုသည့် သံလိုက်စက်ကွင်းအား vivo x-ray လေ့လာမှုတစ်ခုနှင့် အလားတူစွာ ပေါင်းခံ stent ကုပ်များဖြင့် လေပြွန်အပေါ်တွင် ကိုင်ဆောင်ထားသည့် တူညီသော သံလိုက်များဖြင့် ဖွဲ့စည်းထားသည် (ပုံ 4)။LV-MP ၏ 50 µl ပမာဏ (2 x 25 µl aliquots) သည် ယခင်က ဖော်ပြထားသည့်အတိုင်း gel-tipped pipette ကို အသုံးပြု၍ လေပြွန် (n = 3 တိရစ္ဆာန်များ) သို့ ပေးပို့ခဲ့သည်။ထိန်းချုပ်မှုအုပ်စု (n = 3 တိရစ္ဆာန်) သည် သံလိုက်အသုံးမပြုဘဲ တူညီသော LV-MP ကို ​​ရရှိခဲ့သည်။ပြုတ်ရည်ပြီးသွားသောအခါ၊ cannula ကို endotracheal tube မှဖယ်ရှားပြီးတိရစ္ဆာန်ကို extubated လုပ်သည်။ဖယ်ရှားခြင်းမပြုမီ 10 မိနစ်ကြာသံလိုက်နေရာတွင်တည်ရှိသည်။ကြွက်များကို အရေပြားအောက်ပိုင်း meloxicam (1 ml/kg) (Ilium, Australia) ဖြင့် ထိုးပေးပြီးနောက် မေ့ဆေးကို ဖယ်ထုတ်ပြီးနောက် အစာအိမ်အတွင်းတွင်းထိုးဆေး 1 mg/kg atipamazole hydrochloride (Antisedan, Zoetis, Australia) ဖြင့် ထိုးပေးသည်။မေ့ဆေးပေးပြီး ပြန်လည်ကောင်းမွန်လာသည်အထိ ကြွက်များကို နွေးထွေးစွာ စောင့်ရှောက်ပေးခဲ့သည်။
ဇီဝဘေးကင်းရေး ကက်ဘိနက်တွင် LV-MP ပေးပို့သည့်ကိရိယာ။ET tube ၏ မီးခိုးရောင် Luer-lock အင်္ကျီလက်စွပ်သည် ပါးစပ်မှ ပေါက်ထွက်ပြီး ပုံတွင်ပြထားသည့် gel pipette အစွန်အဖျားကို ET tube မှတဆင့် လေပြွန်ထဲသို့ လိုချင်သောအတိမ်အနက်သို့ ထည့်သွင်းထားသည်ကို သင်တွေ့နိုင်သည်။
LV-MP စီမံအုပ်ချုပ်မှုလုပ်ထုံးလုပ်နည်းပြီးနောက် တစ်ပတ်အကြာတွင် တိရိစ္ဆာန်များအား 100% CO2 ရှူရှိုက်ခြင်းဖြင့် လူသားဆန်စွာ ယဇ်ပူဇော်ခံရပြီး LacZ ဖော်ပြမှုကို ကျွန်ုပ်တို့၏ စံ X-gal ကုသမှုကို အသုံးပြု၍ အကဲဖြတ်ခဲ့ပါသည်။endotracheal tube နေရာချထားခြင်းကြောင့် မည်သည့်စက်ပိုင်းဆိုင်ရာ ထိခိုက်မှု သို့မဟုတ် အရည်ထိန်းထားခြင်းကြောင့်မဆို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုတွင် caudal အရိုးနုအကွင်းသုံးခုကို ဖယ်ရှားခဲ့သည်။လေပြွန်တစ်ခုစီကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာရန်အတွက် နှစ်ပိုင်းခွဲရရှိရန် အလျားလိုက်ဖြတ်ပြီး အလင်းမျက်နှာပြင်ကိုမြင်ယောင်ရန် Minutien အပ် (Fine Science Tools) ကို အသုံးပြု၍ ဆီလီကွန်ရော်ဘာ (Sylgard၊ Dow Inc) ပါရှိသော ခွက်တစ်ခုတွင် ထည့်ထားသည်။DigiLite ကင်မရာနှင့် TCapture ဆော့ဖ်ဝဲလ် (Tucsen Photonics၊ China) ဖြင့် Nikon အဏုစကုပ် (SMZ1500) ကို အသုံးပြု၍ အသွင်ပြောင်းဆဲလ်များ၏ ဖြန့်ဖြူးမှုနှင့် စရိုက်လက္ခဏာတို့ကို အတည်ပြုခဲ့သည်။ပုံများကို 20x ချဲ့ခြင်း (လေပြွန်၏အကျယ်အဝန်းအတွက် အမြင့်ဆုံးဆက်တင်များအပါအဝင်) နှင့် trachea ၏အရှည်တစ်ခုလုံးကို အဆင့်ဆင့်ပြသထားပြီး ပုံတစ်ပုံချင်းစီကြားတွင် လုံလုံလောက်လောက်ထပ်နေစေရန်အတွက် ပုံများကို "ချုပ်ရန်" ခွင့်ပြုပေးပါသည်။ထို့နောက် လေပြွန်တစ်ခုစီမှ ရုပ်ပုံများကို Planar motion algorithm ကို အသုံးပြု၍ Composite Image Editor ဗားရှင်း 2.0.3 (Microsoft Research) ကို အသုံးပြု၍ ပေါင်းစပ်ရုပ်ပုံတစ်ပုံအဖြစ် ပေါင်းစပ်ခဲ့သည်။ တိရိစ္ဆာန်တစ်ခုစီမှ tracheal composite ပုံများအတွင်းရှိ LacZ expression ၏ ဧရိယာအား ယခင်က ဖော်ပြခဲ့သည့်အတိုင်း 0.35 < Hue < 0.58၊ Saturation > 0.15 နှင့် Value < 0.7 တို့ကို အသုံးပြု၍ အလိုအလျောက် MATLAB script (R2020a၊ MathWorks) ကို အသုံးပြု၍ အရေအတွက်ကို တိုင်းတာခဲ့ပါသည်။ တိရိစ္ဆာန်တစ်ခုစီမှ tracheal composite ပုံများအတွင်းရှိ LacZ expression ၏ ဧရိယာအား ယခင်က ဖော်ပြထားသည့်အတိုင်း 0.35 < Hue < 0.58၊ Saturation > 0.15 နှင့် Value < 0.7 တို့ကို အသုံးပြု၍ တိုင်းတာသည်။ Площадь экспрессии LacZ в составных изображениях трахеи от каждого животного была количественно определена с использованием автоматизированного сценария MATLAB (R2020a, MathWorks), как описано ранее28, с использованием настроек 0,35 <оттенок <0,58, насыщенность> 0,15 и значение <0 ၊၇။ တိရိစ္ဆာန်တစ်ခုစီမှပေါင်းစပ် tracheal ပုံများတွင် LacZ expression ၏ဧရိယာအား 0.35 ၏ဆက်တင်များကိုအသုံးပြု၍ အလိုအလျောက် MATLAB script (R2020a၊ MathWorks) ကိုအသုံးပြု၍ ပမာဏကို တိုင်းတာခဲ့သည်0.15 နှင့် တန်ဖိုး <0 .7 ။前所前所述, 使用使用使用自动 matlab 脚本对每只动物动物的气管气管复合复合复合复合气管图像复合中中图像复合复合复合复合图像复合图像图像图像图像图像复合表达图像表达表达表达表达表达进行表达表达表达区域区域表达表达使用使用使用使用使用使用使用使用使用使用使用使用使用使用使用使用使用使用 <色调.35 <色调) <0.58 饱和度> 0.15 和值的如前所述, 自动自动自动自动 matlab 脚本 (R2020A, Mathworporks) 来自来自的气管复合复合图像的的的的的的的的的的的的的表达的的表达的的的的的的的的的的的的表达的的使用的使用使用使用使用使用使用使用使用使用使用…….. . . . . . . . . . . . . ဟစ် Области экспрессии LacZ на составных изображениях трахеи каждого животного количественно определяли с использованием автоматизированного сценария MATLAB (R2020a, MathWorks), как описано ранее, с использованием настроек 0,35 <оттенок <0,58, насыщенность> 0,15 и значение <0,7 . 0.35 < hue < 0.58၊ saturation > 0.15 နှင့် value တို့ကို အသုံးပြု၍ ယခင်က ဖော်ပြထားသည့်အတိုင်း 0.35 < hue < 0.58၊ saturation > 0.15 နှင့် value . < 0.7GIMP v2.10.24 ရှိ တစ်ရှူးပုံစံများကို ခြေရာခံခြင်းဖြင့်၊ တစ်ရှူးဧရိယာကိုသိရှိနိုင်ပြီး tracheal တစ်ရှူးအပြင်ဘက်တွင် မှားယွင်းသောရှာဖွေတွေ့ရှိမှုများကို ကာကွယ်ရန် ပေါင်းစပ်ပုံတစ်ပုံစီအတွက် မျက်နှာဖုံးတစ်ခုကို ကိုယ်တိုင်ဖန်တီးခဲ့သည်။တိရိစ္ဆာန်တစ်ခုစီမှ ပေါင်းစပ်ထားသော ရုပ်ပုံများအားလုံးမှ စွန်းထင်းနေသော ဧရိယာများကို ထိုတိရစ္ဆာန်အတွက် စုစုပေါင်း စွန်းထင်းနေသော ဧရိယာကို ပေးဆောင်ရန် ပေါင်းစပ်ထားသည်။ထို့နောက် ပုံမှန်ပြုလုပ်ထားသော ဧရိယာရရှိရန် မျက်နှာဖုံး၏ စုစုပေါင်းဧရိယာဖြင့် ဆေးခြယ်ထားသောနေရာကို ပိုင်းခြားထားသည်။
လေပြွန်တစ်ခုစီကို paraffin တွင် မြှုပ်ထားပြီး အထူ 5 µm ခွဲထားသည်။အပိုင်းများကို 5 မိနစ်ကြာ ကြားနေအမြန်အနီဖြင့် ဆန့်ကျင်ပြီး ဓာတ်ပုံများကို Nikon Eclipse E400 အဏုကြည့်မှန်ပြောင်း၊ DS-Fi3 ကင်မရာနှင့် NIS ဒြပ်စင်ဖမ်းဆော့ဖ်ဝဲ (ဗားရှင်း 5.20.00) ကို အသုံးပြု၍ ပုံများကို ရယူထားသည်။
စာရင်းအင်းပိုင်းခြားစိတ်ဖြာမှုအားလုံးကို GraphPad Prism v9 (GraphPad Software, Inc.) တွင် ပြုလုပ်ခဲ့သည်။ကိန်းဂဏန်းအချက်အလတ် အရေးပါမှုကို p ≤ 0.05 တွင် သတ်မှတ်ခဲ့သည်။Shapiro-Wilk စမ်းသပ်မှုကို အသုံးပြု၍ ပုံမှန်အတိုင်း စမ်းသပ်ခဲ့ပြီး LacZ စွန်းထင်းမှုတွင် ကွဲပြားမှုများကို တွဲမထားသော t-test ကို အသုံးပြု၍ အကဲဖြတ်ခဲ့သည်။
ဇယား 1 တွင်ဖော်ပြထားသော MP ခြောက်ခုကို PCXI မှစစ်ဆေးခဲ့ပြီး မြင်နိုင်စွမ်းကို ဇယား 2 တွင်ဖော်ပြထားပါသည်။ polystyrene MP နှစ်ခု (MP1 နှင့် MP2; 18 µm နှင့် 0.25 µm အသီးသီး) ကို PCXI မှမမြင်နိုင်သော်လည်း ကျန်နမူနာများကို ဖော်ထုတ်နိုင်ပါသည် (ဥပမာ ပုံ 5 တွင် ပြထားသည်)။MP3 နှင့် MP4 ကို အားနည်းစွာမြင်နိုင်သည် (10-15% Fe3O4; 0.25 µm နှင့် 0.9 µm အသီးသီး)။MP5 (98% Fe3O4; 0.25 µm) တွင် စမ်းသပ်ထားသည့် အသေးငယ်ဆုံးအမှုန်အချို့ပါရှိသော်လည်း ၎င်းသည် အထင်ရှားဆုံးဖြစ်သည်။CombiMag MP6 ထုတ်ကုန်သည် ခွဲခြားရန်ခက်ခဲသည်။ကိစ္စရပ်တိုင်းတွင်၊ ကျွန်ုပ်တို့၏ MFs များကို ထောက်လှမ်းနိုင်မှုသည် သံလိုက်အား သွေးကြောမျှင်များဆီသို့ အပြိုင်အပြန်အလှန်ရွှေ့ခြင်းဖြင့် အလွန်တိုးတက်ကောင်းမွန်လာပါသည်။သံလိုက်များသည် သွေးကြောမျှင်များမှ ရွေ့သွားသောအခါ၊ အမှုန်များကို ကြိုးရှည်များဖြင့် ဆွဲထုတ်လိုက်သော်လည်း သံလိုက်များ ချဉ်းကပ်လာကာ သံလိုက်စက်ကွင်းများ အားကောင်းလာသောအခါ အမှုန်များသည် သွေးကြောမျှင်၏ အပေါ်ယံမျက်နှာပြင်ဆီသို့ ရွေ့သွားသောကြောင့် အမှုန်များ တိုသွားသည် (နောက်ဆက်တွဲ ဗီဒီယို S1 ကို ကြည့်ပါ။ : MP4)၊ မျက်နှာပြင်ရှိ အမှုန်သိပ်သည်းဆကို တိုးစေသည်။အပြန်အလှန်အားဖြင့် သံလိုက်ကို သွေးကြောမျှင်များမှ ဖယ်ရှားလိုက်သောအခါ၊ အကွက်၏ ကြံ့ခိုင်မှု လျော့နည်းလာပြီး MP များသည် သွေးကြောမျှင်၏ အပေါ်မျက်နှာပြင်မှ ဆန့်ထွက်နေသော ကြိုးရှည်များအဖြစ် ပြန်လည်စီစဉ်သည် (နောက်ဆက်တွဲ ဗီဒီယို S2: MP4 ကိုကြည့်ပါ)။သံလိုက်ရွေ့လျားမှုရပ်သွားပြီးနောက်၊ အမှုန်များသည် မျှခြေအနေအထားသို့ရောက်ရှိပြီးနောက် အချိန်အတန်ကြာ ဆက်လက်ရွေ့လျားသွားပါသည်။MP သည် သွေးကြောမျှင်၏ အပေါ်ဘက်မျက်နှာပြင်နှင့် ဝေးရာသို့ ရွေ့လျားလာသောအခါ သံလိုက်အမှုန်များသည် အရည်မှတဆင့် အမှိုက်များကို ဆွဲငင်တတ်သည်။
PCXI အောက်တွင် MP ၏မြင်နိုင်စွမ်းသည် နမူနာများကြားတွင် သိသိသာသာကွဲပြားသည်။(က) MP3၊ (ခ) MP4၊ (ဂ) MP5 နှင့် (ဃ) MP6။ဤတွင်ပြထားသည့်ပုံများအားလုံးကို သွေးကြောမျှင်အထက် 10 မီလီမီတာခန့်ရှိသော သံလိုက်ဖြင့်ရိုက်ထားသည်။ထင်ရှားသော စက်ဝိုင်းကြီးများသည် သွေးကြောမျှင်များအတွင်း ပိတ်မိနေသော လေပူဖောင်းများဖြစ်ပြီး အဆင့်ဆန့်ကျင်ဘက်ပုံ၏ အဖြူအမည်း အစွန်းအင်္ဂါရပ်များကို ရှင်းရှင်းလင်းလင်းပြသထားသည်။အနီရောင်အကွက်သည် အလင်းအမှောင်ကို မြှင့်တင်ပေးသည့် ချဲ့ထွင်မှုကို ညွှန်ပြသည်။ပုံများအားလုံးရှိ သံလိုက်ဆားကစ်များ၏ အချင်းများသည် အတိုင်းအတာမဟုတ်သည့်အပြင် ပြထားသည်ထက် အဆ 100 ခန့်ပိုကြီးသည်ကို သတိပြုပါ။
သံလိုက်သည် သွေးကြောမျှင်၏ထိပ်တစ်လျှောက် ဘယ်ညာရွေ့လျားလာသည်နှင့်အမျှ MP ကြိုး၏ထောင့်သည် သံလိုက်နှင့်လိုက်လျောညီထွေဖြစ်စေရန် ပြောင်းလဲသွားသည် (ပုံ 6 ကိုကြည့်ပါ)၊ ထို့ကြောင့် သံလိုက်စက်ကွင်းလိုင်းများကို ဖော်ပြသည်။MP3-5 အတွက်၊ chord သည် threshold angle သို့ရောက်ရှိပြီးနောက်၊ အမှုန်များသည် capillary ၏အပေါ်ဘက်မျက်နှာပြင်တစ်လျှောက်သို့ ဆွဲယူသွားပါသည်။၎င်းသည် သံလိုက်စက်ကွင်းအား အပြင်းထန်ဆုံးဖြစ်သည့် အနီးအနားရှိ အမတ်များကို ပိုမိုကြီးမားသောအုပ်စုများအဖြစ် အစုလိုက်အပြုံလိုက်ဖြစ်စေသည် (နောက်ဆက်တွဲဗီဒီယို S3: MP5 ကိုကြည့်ပါ)။MP သည် အရည်-လေမျက်နှာပြင်တွင် စုစည်း၍ အာရုံစူးစိုက်မှုကို ဖြစ်စေသည့် သွေးကြောမျှင်များ၏ အဆုံးကို နီးကပ်စွာ ပုံဖော်သည့်အခါတွင်လည်း ၎င်းသည် အထူးသဖြင့် ထင်ရှားသည်။MP3-5 ပါရှိသည့် အမျိုးအစားများထက် ခွဲခြားရခက်သည့် MP6 ရှိ အမှုန်များသည် သံလိုက်၏ သွေးကြောမျှင်တစ်လျှောက် ရွေ့သွားသောအခါ မဆွဲယူဘဲ MP ကြိုးများ ကွဲသွားကာ အမှုန်များကို မြင်ကွင်းတွင် ချန်ထားခဲ့သည် (နောက်ဆက်တွဲ ဗီဒီယို S4:MP6 ကိုကြည့်ပါ)။အချို့ကိစ္စများတွင်၊ ဓါတ်ပုံရိုက်သည့်နေရာမှ သံလိုက်ကို အကွာအဝေးရွှေ့ခြင်းဖြင့် အသုံးချသံလိုက်စက်ကွင်းကို လျှော့ချလိုက်သောအခါ ကျန်အမတ်များသည် ဆွဲငင်အားဖြင့် ပြွန်အောက်ခြေမျက်နှာပြင်သို့ ဖြည်းညှင်းစွာဆင်းလာကာ ကြိုးတန်းတွင်ကျန်နေပါသည် (နောက်ဆက်တွဲဗီဒီယို S5: MP3 ကိုကြည့်ပါ) .
သံလိုက်သည် သွေးကြောမျှင်များအထက် ညာဘက်သို့ရွေ့သွားသောအခါ MP ကြိုး၏ထောင့်သည် ပြောင်းလဲသွားသည်။(က) MP3၊ (ခ) MP4၊ (ဂ) MP5 နှင့် (ဃ) MP6။အနီရောင်အကွက်သည် အလင်းအမှောင်ကို မြှင့်တင်ပေးသည့် ချဲ့ထွင်မှုကို ညွှန်ပြသည်။ကျေးဇူးပြု၍ ထပ်လောင်းဗီဒီယိုများသည် ဤရုပ်ပုံများတွင် မြင်သာထင်သာမရနိုင်သော အရေးကြီးသော အမှုန်အမွှားဖွဲ့စည်းပုံနှင့် တက်ကြွသောအချက်အလက်များကို ဖော်ပြသောကြောင့် သတင်းအချက်အလက်ဆိုင်ရာ ရည်ရွယ်ချက်များအတွက်ဖြစ်ကြောင်း ကျေးဇူးပြု၍ သတိပြုပါ။
ကျွန်ုပ်တို့၏စမ်းသပ်ချက်များအရ သံလိုက်အား လေပြွန်တစ်လျှောက် ဖြည်းညှင်းစွာရွေ့လျားခြင်းသည် vivo ရှိ ရှုပ်ထွေးသောလှုပ်ရှားမှု၏အခြေအနေတွင် MF ၏အမြင်အာရုံကို လွယ်ကူချောမွေ့စေကြောင်း ပြသထားသည်။သွေးကြောမျှင်တွင် polystyrene beads (MP1 နှင့် MP2) ကို မမြင်နိုင်သောကြောင့် vivo စစ်ဆေးမှုတွင် မလုပ်ဆောင်ခဲ့ပါ။ကျန်ရှိသော MF လေးခုကို ဒေါင်လိုက်မှ 30° ခန့်တွင်ရှိသော သံလိုက်၏ဝင်ရိုးရှည်ဖြင့် vivo တွင် စမ်းသပ်ထားသည် (ပုံ 2b နှင့် 3a ကိုကြည့်ပါ)၊ ၎င်းသည် MF ကြိုးများပိုရှည်လာပြီး ပိုမိုထိရောက်မှုရှိသည် သံလိုက်တစ်ခုထက်။.ဖွဲ့စည်းမှု ရပ်ဆိုင်းထားသည်။MP3၊ MP4 နှင့် MP6 တို့ကို မည်သည့်သက်ရှိတိရစ္ဆာန်များ၏ လေပြွန်တွင်မျှ မတွေ့ရှိရပါ။တိရစ္ဆာန်များကို လူသားဆန်စွာ သတ်ဖြတ်ပြီးနောက် ကြွက်များ၏ အသက်ရှူလမ်းကြောင်းကို မြင်ယောင်ကြည့်သောအခါ၊ ဆေးထိုးအပ်ပန့်ကို အသုံးပြု၍ အပိုပမာဏကို ထပ်လောင်းထည့်လိုက်သည့်တိုင် အမှုန်အမွှားများသည် မမြင်နိုင်ပေ။MP5 တွင် သံအောက်ဆိုဒ်ပါဝင်မှု အမြင့်ဆုံးဖြစ်ပြီး တစ်ခုတည်းသောမြင်နိုင်သော အမှုန်အမွှားဖြစ်သောကြောင့် vivo တွင် MP အပြုအမူကို အကဲဖြတ်ရန်နှင့် လက္ခဏာရပ်အဖြစ် အသုံးပြုထားသည်။
MF ထည့်သွင်းစဉ်အတွင်း သံလိုက်ကို လေပြွန်ပေါ်တွင် နေရာချထားခြင်းကြောင့် မြင်ကွင်းနယ်ပယ်တွင် MFs အများအပြားကို စုစည်းထားသော်လည်း အားလုံးမဟုတ်ပေ။အမှုန်များ၏ tracheal entry ကို လူသားဆန်စွာ သန့်စင်ထားသော တိရိစ္ဆာန်များတွင် အကောင်းဆုံး စောင့်ကြည့်လေ့လာသည်။ပုံ 7 နှင့် နောက်ဆက်တွဲဗီဒီယို S6: MP5 သည် လေပြွန်မျက်နှာပြင်ပေါ်ရှိ အမှုန်အမွှားများ၏ သံလိုက်ဓာတ်ကို လျင်မြန်စွာဖမ်းယူကာ ချိန်ညှိမှုကို ပြသထားပြီး လွှတ်တော်အမတ်များသည် လေပြွန်၏အလိုရှိသောနေရာများသို့ ပစ်မှတ်ထားနိုင်ကြောင်း ဖော်ပြသည်။MF ပေးပို့ပြီးနောက် လေပြွန်တစ်လျှောက် ပိုမိုဝေးကွာစွာ ရှာဖွေသောအခါတွင်၊ ၎င်းတို့သည် အရည်စီမံခန့်ခွဲမှုအတွင်း အမြင့်ဆုံးသံလိုက်စက်ကွင်းအား စွမ်းအားရှိသော ဒေသမှတဆင့် ပို့ဆောင်ပေးသောကြောင့် အချို့သော MFs များသည် carina နှင့် ပိုမိုနီးကပ်လာသည်ကို တွေ့ရှိရပါသည်။လုပ်ငန်းစဉ်။သို့သော် မီးဖွားပြီးနောက် ပါလီမန်အမတ်များ၏ အာရုံစူးစိုက်မှုသည် ပုံဧရိယာတစ်ဝိုက်တွင် ပိုများနေသဖြင့် ပါလီမန်အများစုသည် သံလိုက်ဓာတ်အား အမြင့်ဆုံးဖြစ်သော လေလမ်းကြောင်းဒေသများတွင် ကျန်ရှိနေသေးသည်ဟု အကြံပြုထားသည်။
(က) မတိုင်မီနှင့် (ခ) ပုံရိပ်များသည် ပုံရိပ်ဖော်ဧရိယာ၏အထက်တွင် ထားရှိသော သံလိုက်ဖြင့် မကြာသေးမီက သန့်စင်ထားသော ကြွက်တစ်ကောင်၏ လေပြွန်ထဲသို့ MP5 ကို ပေးပို့ပြီးနောက် ပုံများ။ပုံဖော်ပြသည့်နေရာသည် အရိုးနုအဝိုင်းနှစ်ခုကြားတွင် တည်ရှိသည်။အမတ်မပို့မီ လေလမ်းကြောင်းထဲတွင် အရည်အချို့ရှိသည်။အနီရောင်အကွက်သည် အလင်းအမှောင်ကို မြှင့်တင်ပေးသည့် ချဲ့ထွင်မှုကို ညွှန်ပြသည်။ဤပုံများကို S6: MP5 နောက်ဆက်တွဲ ဗီဒီယိုတွင် ဖော်ပြထားသော ဗီဒီယိုမှ ယူပါသည်။
Vivo ရှိ လေပြွန်တစ်လျှောက် သံလိုက်ကို ရွေ့လျားခြင်းဖြင့် လေပြွန်မျက်နှာပြင်ရှိ MP ကွင်းဆက်၏ ထောင့်ကို သွေးကြောမျှင်များအတွင်း တွေ့ရသည့်အတိုင်း (ပုံ 8 နှင့် နောက်ဆက်တွဲ ဗီဒီယို S7: MP5 ကိုကြည့်ပါ)။သို့သော်လည်း ကျွန်ုပ်တို့၏လေ့လာမှုတွင် ဆံချည်မျှင်သွေးကြောမျှင်များကဲ့သို့ သက်ရှိအသက်ရှူလမ်းကြောင်း၏မျက်နှာပြင်တစ်လျှောက် လွှတ်တော်အမတ်များကို ဆွဲငင်ခြင်းမပြုနိုင်ပါ။အချို့ကိစ္စများတွင်၊ သံလိုက်သည် ဘယ်ညာရွှေ့သည်နှင့် MP ကွင်းဆက်သည် ရှည်သည်။စိတ်ဝင်စားစရာမှာ၊ သံလိုက်သည် လေပြွန်တစ်လျှောက် အလျားလိုက်ရွေ့သွားသောအခါ အမှုန်ကွင်းဆက်သည် အရည်၏မျက်နှာပြင်အလွှာ၏ အတိမ်အနက်ကို ပြောင်းလဲသွားသည်ကို တွေ့ရှိခဲ့ရပြီး သံလိုက်အပေါ်မှ တိုက်ရိုက်ရွေ့လျားသွားသည့်အခါ ချဲ့ထွင်လာကာ အမှုန်ကွင်းဆက်အား ဒေါင်လိုက်အနေအထားသို့ လှည့်လိုက်သောအခါတွင် ကျယ်လာသည် (ကြည့်ရှုပါ။ နောက်ဆက်တွဲ ဗီဒီယို S7)။: MP5 at 0:09၊ အောက်ခြေ)။သံလိုက်အား လေပြွန်၏အပေါ်ဘက်သို့ ရွေ့သွားသောအခါ (ဥပမာ၊ လေပြွန်၏အရှည်တစ်လျှောက်ထက် တိရစ္ဆာန်၏ဘယ်ဘက် သို့မဟုတ် ညာဘက်သို့) သံလိုက်ရွေ့လျားသွားသောအခါတွင် လက္ခဏာရပ်ပြောင်းသွားသည်။အမှုန်အမွှားများကို ၎င်းတို့၏လှုပ်ရှားမှုအတွင်း ရှင်းရှင်းလင်းလင်းမြင်နေရဆဲဖြစ်သော်လည်း သံလိုက်အား လေပြွန်မှဖယ်ရှားလိုက်သောအခါ၊ အမှုန်ကြိုးများ၏ ထိပ်ဖျားများကို မြင်နိုင်သည် (နောက်ဆက်တွဲ ဗီဒီယို S8:MP5 ကို 0:08 တွင် စတင်ကြည့်ရှုပါ)။၎င်းသည် ဖန်သားမျှင်အတွင်း အသုံးချသံလိုက်စက်ကွင်း၏ လုပ်ဆောင်မှုအောက်တွင် သံလိုက်စက်ကွင်း၏ သတိပြုမိသည့် အပြုအမူနှင့် ကိုက်ညီသည်။
အသက်ရှင်လျက် မေ့ဆေးပေးထားသော ကြွက်၏ လေပြွန်အတွင်း MP5 ကို ပြသသည့် နမူနာပုံများ။(က) လေပြွန်၏ အပေါ်နှင့် ဘယ်ဘက်တွင် ပုံများကို ရယူရန် သံလိုက်အား အသုံးပြုပြီး၊ ထို့နောက် (ခ) သံလိုက်အား ညာဘက်သို့ ရွှေ့ပြီးနောက်။အနီရောင်အကွက်သည် အလင်းအမှောင်ကို မြှင့်တင်ပေးသည့် ချဲ့ထွင်မှုကို ညွှန်ပြသည်။ဤပုံများသည် S7 ၏ နောက်ဆက်တွဲ ဗီဒီယို- MP5 တွင် ဖော်ပြထားသော ဗီဒီယိုမှဖြစ်သည်။
အစွန်းနှစ်ချောင်းကို လေပြွန်အထက်နှင့် တောင်အောက်ဘက်သို့ ညှိယူသောအခါ (ဆိုလိုသည်မှာ ဆွဲဆောင်မှု၊ ပုံ 3b) တွင် MP chord များသည် ပိုမိုရှည်လျားလာပြီး လေပြွန်၏နောက်ဘက်နံရံတွင် တည်ရှိနေမည့်အစား လေပြွန်၏ဘေးဘက်နံရံတွင် တည်ရှိနေပါသည်။ လေပြွန် (နောက်ဆက်တွဲကိုကြည့်ပါ)။ဗီဒီယို S9:MP5)။သို့သော်၊ ဆိုက်တစ်ခုတွင် မြင့်မားသောအမှုန်များ (ဆိုလိုသည်မှာ၊ လေပြွန်၏နောက်ဘက်မျက်နှာပြင်) ကို သံလိုက်စက်တစ်ခုတည်းဖြင့် ဖြစ်ပေါ်လေ့ရှိသော သံလိုက်နှစ်ခုကိရိယာကို အသုံးပြု၍ အရည်စီမံပြီးနောက်တွင် မတွေ့ရှိပါ။ထို့နောက်၊ ဆန့်ကျင်ဘက်ဝင်ရိုးစွန်းများ (ပုံ 3c) ကို တွန်းလှန်ရန် သံလိုက်တစ်ခုအား ပြင်ဆင်သတ်မှတ်လိုက်သောအခါ၊ မြင်ကွင်းနယ်ပယ်တွင် မြင်နိုင်သော အမှုန်အရေအတွက်သည် ပေးပို့ပြီးနောက် တိုးလာခြင်းမရှိပေ။သံလိုက်များကို အသီးသီး ဆွဲဆောင်ရန် သို့မဟုတ် တွန်းပို့သည့် မြင့်မားသော သံလိုက်စက်ကွင်း ခွန်အားကြောင့် သံလိုက်ပုံစံ နှစ်ခုစလုံးကို တပ်ဆင်ခြင်းသည် စိန်ခေါ်မှုဖြစ်သည်။ထို့နောက် တပ်ဆင်မှုအား လေလမ်းကြောင်းနှင့်အပြိုင် သံလိုက်တစ်ခုတည်းအဖြစ်သို့ ပြောင်းလဲခဲ့သော်လည်း 90 ဒီဂရီ ထောင့်တွင် လေလမ်းကြောင်းများကို ဖြတ်သန်းသွားရာ လမ်းကြောင်းမှ အမှုန်အမွှားများ စုစည်းမှုဖြစ်နိုင်ခြေကို ဆုံးဖြတ်ရန် ရည်ရွယ်ထားသည့် လမ်းကြောင်းသည် လေပြွန်နံရံကို ဖြတ်ကျော်သွားစေရန် ရည်ရွယ်သည်။ ဘေးတိုက်နံရံ။သတိပြုပါ။သို့သော်၊ ဤဖွဲ့စည်းပုံတွင်၊ ဖော်ထုတ်နိုင်သော MF စုဆောင်းခြင်းလှုပ်ရှားမှု သို့မဟုတ် သံလိုက်လှုပ်ရှားမှုမရှိပါ။ဤရလဒ်များအားလုံးအပေါ်အခြေခံ၍ ဗီဇသယ်ဆောင်သူများ၏ vivo လေ့လာမှုတွင် သံလိုက်တစ်ခုတည်းနှင့် 30 ဒီဂရီ တိမ်းညွှတ်မှုပုံစံကို ရွေးချယ်ခဲ့သည် (ပုံ 3a)။
တိရစ္ဆာန်ကို လူသားဆန်စွာ ယဇ်ပူဇော်ပြီးပြီးချင်း အကြိမ်များစွာ ပုံရိပ်ဖော်သောအခါ၊ သံလိုက်၏ ဘာသာပြန်သည့် ရွေ့လျားမှုနှင့်အညီ သေးငယ်သော အမှုန်အမွှားလိုင်းများကို ပြတ်သားသော သေးငယ်သော အမှုန်အမွှားများကို ခွဲခြားသိမြင်နိုင်စေရန်အတွက် သံလိုက်၏ ဘာသာပြန်သည့် ရွေ့လျားမှုနှင့်အညီ 'ယိမ်းယိုင်နေသည်' ကို ဆိုလိုပါသည်။MP6 အမှုန်များ၏ တည်ရှိမှုနှင့် ရွေ့လျားမှုကို ရှင်းရှင်းလင်းလင်း မြင်နိုင်သည်။
LV-LacZ ၏ titer သည် 1.8 x 108 IU/mL ဖြစ်ပြီး 1:1 ကို CombiMag MP (MP6) နှင့် ရောစပ်ပြီးနောက်၊ တိရစ္ဆာန်များကို 50 µl နှင့် LV ယာဉ်၏ 9 x 107 IU/ml (ဆိုလိုသည်မှာ 4.5) x 106 TU/ကြွက်)။) ) ။ဤလေ့လာမှုများတွင်၊ အလုပ်သမားအတွင်း သံလိုက်ကို ရွှေ့မည့်အစား LV transduction သည် (က) သံလိုက်စက်ကွင်းမရှိသည့်အခါ vector delivery နှင့် နှိုင်းယှဉ်လျှင် ပိုကောင်းလာနိုင်ကြောင်း ဆုံးဖြတ်ရန် သံလိုက်ကို တည်နေရာတစ်ခုတည်းတွင် ပြုပြင်ပြီး (ခ)၊ အာရုံစိုက်ပါ။ဆဲလ်များသည် အသက်ရှုလမ်းကြောင်းအပေါ်ပိုင်းရှိ သံလိုက်ပစ်မှတ်နေရာများတွင် ကူးပြောင်းသွားပါသည်။
သံလိုက်များရှိနေခြင်းနှင့် LV vector များနှင့်အတူ CombiMag ကိုအသုံးပြုခြင်းသည် ကျွန်ုပ်တို့၏စံ LV vector ပေးပို့မှုပရိုတိုကောကဲ့သို့ တိရစ္ဆာန်ကျန်းမာရေးကို ဆိုးရွားစွာထိခိုက်စေပုံမပေါ်ပါ။စက်ပိုင်းဆိုင်ရာ အနှောက်အယှက်ဖြစ်စေသည့် tracheal ဒေသ၏ ရှေ့မျက်နှာစာပုံများ (နောက်ဆက်တွဲ ပုံ 1) သည် LV-MP ကုသသည့်အဖွဲ့တွင် သံလိုက်တစ်ခုပါဝင်မှုတွင် သိသိသာသာမြင့်မားသော transduction အဆင့်ရှိကြောင်း ပြသခဲ့သည် (ပုံ. 9a)။ထိန်းချုပ်မှုအဖွဲ့ (ပုံ 9b) တွင် အပြာရောင် LacZ စွန်းထင်းမှု အနည်းငယ်သာ ရှိခဲ့သည်။X-Gal-စွန်းထင်းသော ပုံမှန်ဒေသများ၏ ပမာဏကို တိုင်းတာခြင်းသည် သံလိုက်စက်ကွင်းတစ်ခုရှိနေခြင်းတွင် LV-MP ၏ စီမံအုပ်ချုပ်မှုသည် ခန့်မှန်းခြေအားဖြင့် 6 ဆ တိုးတက်မှုကို ဖြစ်ပေါ်စေသည် (ပုံ 9c)။
သံလိုက်စက်ကွင်းရှိခြင်းတွင် LV-MP ဖြင့် tracheal transduction ပြသသည့် ပေါင်းစပ်ပုံများ ဥပမာ (က) နှင့် (ခ) သံလိုက်မရှိခြင်း ။(ဂ) သံလိုက်အသုံးပြုခြင်း (*p = 0.029၊ t-test၊ n = 3၊ အုပ်စုတစ်ခုလျှင် ပျမ်းမျှ ± စံလွဲချော်မှု) ၏ ပျမ်းမျှအားဖြင့် လေပြွန်အတွင်းရှိ LacZ transduction ၏ ပုံမှန်ဧရိယာတွင် ကိန်းဂဏန်းအချက်အလက်များ သိသာထင်ရှားစွာ တိုးတက်မှု။
ကြားနေမြန်သော အနီရောင်စွန်းထင်းသည့်အပိုင်းများ (ဥပမာ နောက်ဆက်တွဲပုံ။ 2 တွင်ပြသထားသည်) LacZ-စွန်းထင်းသောဆဲလ်များသည် ယခင်ဖော်ပြခဲ့သည့်အတိုင်းနမူနာနှင့် တူညီသောတည်နေရာတွင် ရှိနေကြောင်း ညွှန်ပြသည်။
လေလမ်းကြောင်းဗီဇကုထုံးတွင် အဓိကစိန်ခေါ်မှုမှာ စိတ်ဝင်စားသည့်နေရာများတွင် သယ်ဆောင်သူအမှုန်အမွှားများကို တိကျသောဒေသခံအဖြစ်သတ်မှတ်ခြင်းနှင့် လေစီးဆင်းမှုနှင့် တက်ကြွသောချွဲများရှင်းလင်းမှုရှိနေခြင်းတို့တွင် မိုဘိုင်းအဆုတ်အတွင်း transduction ထိရောက်မှုအဆင့်မြင့်မားခြင်း၏အောင်မြင်မှုဖြစ်သည်။cystic fibrosis တွင်အသက်ရှူလမ်းကြောင်းဆိုင်ရာရောဂါများကိုကုသရန်အတွက်ရည်ရွယ်သော LV သယ်ဆောင်သူများအတွက်၊ conductive airways အတွင်းရှိအမှုန်အမွှားများ၏နေထိုင်ချိန်ကိုတိုးမြှင့်ခြင်းသည်ယခုအချိန်အထိမရရှိနိုင်သောပန်းတိုင်တစ်ခုဖြစ်သည်။Castellani et al. မှထောက်ပြထားသည့်အတိုင်း၊ transduction ကိုမြှင့်တင်ရန် သံလိုက်စက်ကွင်းများအသုံးပြုခြင်းသည် ရိုးရှင်းမှု၊ စီးပွားရေး၊ ဒေသအလိုက် ပေးပို့မှု၊ ထိရောက်မှုနှင့် ပေါက်ဖွားမှုအချိန်တိုတိုကို ပေါင်းစပ်နိုင်သောကြောင့် ၎င်းသည် အခြားမျိုးဗီဇပေးပို့မှုနည်းလမ်းများဖြစ်သည့် electroporation ထက် အားသာချက်များရှိသည်။နှင့် ယာဉ် 10 ပမာဏ လျော့နည်းနိုင်သည်။သို့ရာတွင်၊ ပြင်ပသံလိုက်စွမ်းအားများ၏ လွှမ်းမိုးမှုအောက်တွင် လေလမ်းကြောင်းအတွင်းရှိ သံလိုက်အမှုန်အမွှားများ၏ စွန့်ထုတ်မှုနှင့် ပြုမူပုံတို့ကို မည်သည့်အခါကမျှ ဖော်ပြခြင်းမပြုခဲ့ဘဲ၊ တကယ်တော့ ဤနည်းလမ်း၏ ဗီဇဖော်ပြမှုအဆင့်ကို နဂိုအတိုင်း သက်ရှိလေလမ်းကြောင်းများတွင် တိုးမြှင့်နိုင်စွမ်းကို vivo တွင် သရုပ်မပြခဲ့ပါ။
PCXI synchrotron ပေါ်ရှိ ကျွန်ုပ်တို့၏ in vitro စမ်းသပ်ချက်တွင် MP polystyrene မှလွဲ၍ ကျွန်ုပ်တို့စမ်းသပ်ထားသော အမှုန်များအားလုံးကို ကျွန်ုပ်တို့အသုံးပြုသည့် ပုံရိပ်ထည့်သွင်းမှုတွင် မြင်တွေ့နိုင်သည်ကို ပြသခဲ့သည်။သံလိုက်စက်ကွင်းတစ်ခု၏ရှေ့မှောက်တွင်၊ သံလိုက်စက်ကွင်းများသည် အမှုန်များအမျိုးအစားနှင့် သံလိုက်စက်ကွင်း၏ ခိုင်ခံ့မှု (ဆိုလိုသည်မှာ သံလိုက်၏အကွာအဝေးနှင့် ရွေ့လျားမှု) တို့နှင့်သက်ဆိုင်သည့် ကြိုးများဖြစ်သည်။ပုံ 10 တွင်ပြထားသည့်အတိုင်း၊ အမှုန်တစ်ခုစီသည် သံလိုက်ဓာတ်ဖြစ်လာပြီး ၎င်း၏ကိုယ်ပိုင်သံလိုက်စက်ကွင်းကို လှုံ့ဆော်ပေးသောကြောင့် ကျွန်ုပ်တို့လေ့လာတွေ့ရှိထားသည့် ကြိုးများကို ဖွဲ့စည်းထားပါသည်။ဤသီးခြားအကွက်များသည် အခြားအလားတူအမှုန်အမွှားများကို စုစည်းကာ နယ်မြေခံစွမ်းအားများ၏ ဆွဲဆောင်မှုနှင့် အခြားအမှုန်များကို တွန်းလှန်ခြင်းကြောင့် ဒေသတွင်းအင်အားစုများနှင့် ချိတ်ဆက်စေသည်။
အရည်ဖြည့်ထားသော သွေးကြောမျှင်များအတွင်းတွင် ဖြစ်ပေါ်နေသော အမှုန်များ (က၊ ခ) ကွင်းဆက်များနှင့် (ဂ၊ ဃ) လေပြည့်ပြွန်ကို ပြသသည့် ပုံ။သွေးကြောမျှင်များနှင့် လေပြွန်များကို အတိုင်းအတာအဖြစ် ဆွဲမထားကြောင်း သတိပြုပါ။အကန့် (a) တွင် ကွင်းဆက်များစီထားသော Fe3O4 အမှုန်များပါရှိသော MF ၏ ဖော်ပြချက်ပါရှိသည်။
သံလိုက်သည် သွေးကြောမျှင်အပေါ်မှ ရွေ့သွားသောအခါ၊ အမှုန်ကြိုး၏ထောင့်သည် Fe3O4 ပါရှိသော MP3-5 အတွက် အရေးပါသောအဆင့်သို့ရောက်ရှိသွားပြီး၊ ထို့နောက်တွင် အမှုန်ကြိုးသည် ၎င်း၏မူလအနေအထားတွင်မရှိတော့ဘဲ မျက်နှာပြင်တစ်လျှောက် အနေအထားအသစ်သို့ ရွေ့သွားသည်။သံလိုက်။ဖန်သားမျှင် မျက်နှာပြင်သည် ဤရွေ့လျားမှုကို ဖြစ်ပေါ်စေနိုင်လောက်အောင် ချောမွေ့သောကြောင့် ဤအကျိုးသက်ရောက်မှု ဖြစ်ပေါ်နိုင်သည်။စိတ်ဝင်စားစရာမှာ MP6 (CombiMag) သည် အမှုန်အမွှားများသေးငယ်သောကြောင့်၊ ကွဲပြားခြားနားသောအပေါ်ယံပိုင်း သို့မဟုတ် မျက်နှာပြင်အားသွင်းထားခြင်းကြောင့် ဖြစ်ကောင်းဖြစ်နိုင်သည်၊ သို့မဟုတ် မူပိုင်ကယ်ရီယာအရည်များသည် ၎င်းတို့၏ ရွေ့လျားနိုင်မှုကို ထိခိုက်စေသောကြောင့်ဖြစ်သည်။CombiMag အမှုန်အမွှားပုံရှိ ခြားနားမှုမှာလည်း အားနည်းသည်၊ အရည်နှင့် အမှုန်များသည် တူညီသောသိပ်သည်းဆရှိနိုင်သောကြောင့် တစ်ခုနှင့်တစ်ခု အလွယ်တကူ မရွေ့နိုင်ဟု အကြံပြုသည်။သံလိုက်စက်ကွင်းသည် အလွန်လျင်မြန်စွာ ရွေ့လျားပါက အမှုန်များသည် အရည်အတွင်းရှိ အမှုန်များကြား ပွတ်တိုက်မှုကို အမြဲမကျော်လွှားနိုင်ဟု ညွှန်ပြပြီး သံလိုက်စက်ကွင်းအား ခိုင်ခံ့မှုနှင့် သံလိုက်နှင့် ပစ်မှတ်ဧရိယာကြား အကွာအဝေးသည် မလာသင့်ဟု ညွှန်ပြနေပါသည်။ အံ့အားသင့်စရာ။အရေးကြီးတယ်။သံလိုက်များသည် ပစ်မှတ်ဧရိယာတစ်လျှောက် စီးဆင်းနေသော microparticles အများအပြားကို ဖမ်းယူနိုင်သော်လည်း သံလိုက်များသည် CombiMag အမှုန်အမွှားများကို လေပြွန်မျက်နှာပြင်တစ်လျှောက် ရွေ့လျားရန် သံလိုက်အပေါ်တွင် အားကိုးနိုင်မည်မဟုတ်ကြောင်း ဤရလဒ်များက ဖော်ပြသည်။ထို့ကြောင့်၊ vivo LV MF လေ့လာမှုများတွင် လေလမ်းကြောင်းသစ်ပင်၏ အစိတ်အပိုင်းများကို ရုပ်ပိုင်းဆိုင်ရာအရ ပစ်မှတ်ထားရန် တည်ငြိမ်သော သံလိုက်စက်ကွင်းများကို အသုံးပြုသင့်သည်ဟု ကျွန်ုပ်တို့ ကောက်ချက်ချခဲ့သည်။
အမှုန်အမွှားများကို ခန္ဓာကိုယ်ထဲသို့ ပို့ဆောင်ပြီးသည်နှင့်၊ ၎င်းတို့သည် ခန္ဓာကိုယ်၏ ရှုပ်ထွေးသောရွေ့လျားနေသော တစ်ရှူးများ၏ အခြေအနေတွင် ခွဲခြားသတ်မှတ်ရန် ခက်ခဲသော်လည်း MP ကြိုးများကို လေပြွန်ပေါ်မှ အလျားလိုက် ရွေ့လျားခြင်းဖြင့် သံလိုက်အား လေပြွန်ပေါ်မှ အလျားလိုက် ရွေ့လျားခြင်းဖြင့် ပိုမိုကောင်းမွန်လာပါသည်။အချိန်နှင့်တစ်ပြေးညီ ပုံရိပ်ဖော်နိုင်သော်လည်း တိရစ္ဆာန်ကို လူသားဆန်စွာသတ်ပြီးနောက် အမှုန်အမွှားလှုပ်ရှားမှုကို ပိုင်းခြားသိမြင်ရန် ပိုမိုလွယ်ကူပါသည်။အချို့သော အမှုန်အမွှားများကို လေပြွန်အောက်ထပ်တွင် တွေ့ရလေ့ရှိသော်လည်း ပုံရိပ်ဖော်ဧရိယာအပေါ် သံလိုက်ကို နေရာချထားသောအခါ MP ပါဝင်မှုနှုန်းမှာ များသောအားဖြင့် အမြင့်ဆုံးဖြစ်သည်။vitro လေ့လာမှုများနှင့်မတူဘဲ အမှုန်များကို သံလိုက်၏ရွေ့လျားမှုဖြင့် လေပြွန်အောက်သို့ ဆွဲငင်ခြင်းမပြုနိုင်ပါ။ဤတွေ့ရှိချက်သည် လေပြွန်မျက်နှာပြင်ကို ဖုံးအုပ်ထားသည့် ချွဲများ ရှူသွင်းထားသော အမှုန်အမွှားများကို ပုံမှန်အားဖြင့် လုပ်ဆောင်ပြီး ချွဲထဲတွင် ပိတ်မိကာ muco-ciliary clearance ယန္တရားမှတဆင့် ၎င်းတို့ကို ရှင်းလင်းသွားပုံနှင့် ကိုက်ညီပါသည်။
ဆွဲဆောင်ရန်အတွက် လေပြွန်အထက်နှင့် အောက်ရှိ သံလိုက်များကို အသုံးပြုခြင်း (ပုံ. 3b) သည် တစ်ချိန်တည်းတွင် အလွန်စုစည်းနေသော သံလိုက်စက်ကွင်းထက် ပိုမိုတူညီသော သံလိုက်စက်ကွင်းကို ဖြစ်ပေါ်စေနိုင်ပြီး အမှုန်များ ပိုမိုညီညွှတ်စွာ ဖြန့်ကျက်ဖြစ်ပေါ်စေနိုင်သည်ဟု ကျွန်ုပ်တို့ ယူဆပါသည်။.သို့သော်လည်း ကျွန်ုပ်တို့၏ ပဏာမလေ့လာမှုသည် ဤယူဆချက်ကို ထောက်ခံရန် ပြတ်သားသောအထောက်အထား မတွေ့ရှိခဲ့ပါ။အလားတူ၊ သံလိုက်တစ်စုံ (ပုံ. 3c) သည် ပုံဧရိယာအတွင်း အမှုန်အမွှားများဝင်ရောက်မှုကို မဖြစ်ပေါ်စေပါ။ဤတွေ့ရှိချက်နှစ်ခုသည် dual-magnet တပ်ဆင်မှုသည် MP ညွှန်ပြခြင်း၏ ဒေသတွင်းထိန်းချုပ်မှုကို သိသိသာသာမတိုးတက်ကြောင်း သက်သေပြနေပြီး ရလဒ်အားကောင်းသော သံလိုက်စွမ်းအားများကို ညှိရန်ခက်ခဲသောကြောင့် ဤချဉ်းကပ်မှုကို လက်တွေ့ကျမှုနည်းပါးစေသည်။အလားတူ၊ လေပြွန်အထက်နှင့် လေပြွန်တစ်လျှောက် (ပုံ 3d) ကိုလည်း ပုံသဏ္ဌာန်ဧရိယာအတွင်း ကျန်ရှိသော အမှုန်အရေအတွက်ကို မတိုးစေပါ။အစစ်ခံဇုန်ရှိ သံလိုက်စက်ကွင်းအား လျော့ပါးစေသောကြောင့် ဤအခြားရွေးချယ်မှုပုံစံအချို့သည် မအောင်မြင်နိုင်ပေ။ထို့ကြောင့်၊ 30 ဒီဂရီ (ပုံ. 3a) တွင် တစ်ခုတည်းသော သံလိုက်ဖွဲ့စည်းမှုပုံစံကို vivo စမ်းသပ်ခြင်းနည်းလမ်းတွင် အရိုးရှင်းဆုံးနှင့် အထိရောက်ဆုံးဟု ယူဆပါသည်။
LV-MP လေ့လာမှုက LV vector များကို CombiMag နှင့် ပေါင်းစပ်ပြီး သံလိုက်စက်ကွင်းတစ်ခုထံတွင် ရုပ်ပိုင်းဆိုင်ရာ အနှောက်အယှက်ဖြစ်ပြီးနောက် ပို့ဆောင်သောအခါ၊ ထိန်းချုပ်မှုများနှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက လေပြွန်အတွင်း ကူးပြောင်းခြင်းအဆင့်သည် သိသိသာသာတိုးလာကြောင်း ပြသခဲ့သည်။synchrotron ပုံရိပ်ဖော်လေ့လာမှုများနှင့် LacZ ရလဒ်များအပေါ် အခြေခံ၍ သံလိုက်စက်ကွင်းသည် LV ကို လေပြွန်အတွင်း ထိန်းထားနိုင်ပြီး အဆုတ်အတွင်းသို့ ချက်ချင်းနက်နက်ဝင်ရောက်လာသော vector အမှုန်အရေအတွက်ကို လျှော့ချနိုင်ပုံရသည်။ထိုသို့သော ပစ်မှတ်ထားတိုးတက်မှုများသည် ပေးပို့ထားသော titers၊ ပစ်မှတ်မဟုတ်သော ကူးပြောင်းမှု၊ ရောင်ရမ်းမှုနှင့် ကိုယ်ခံအားဆိုင်ရာ ဘေးထွက်ဆိုးကျိုးများနှင့် မျိုးဗီဇလွှဲပြောင်းမှုကုန်ကျစရိတ်များကို လျှော့ချနေစဉ်တွင် ပိုမိုမြင့်မားသော စွမ်းဆောင်ရည်ကို ဖြစ်ပေါ်စေနိုင်သည်။အရေးကြီးသည်မှာ ထုတ်လုပ်သူ၏အဆိုအရ CombiMag ကို အခြားသော ဗိုင်းရပ်စ်ပိုးများ (ဥပမာ AAV) နှင့် nucleic acids များအပါအဝင် အခြားသော မျိုးဗီဇလွှဲပြောင်းနည်းများနှင့် ပေါင်းစပ်အသုံးပြုနိုင်ပါသည်။