Nature.com ကိုလာရောက်လည်ပတ်သည့်အတွက် ကျေးဇူးတင်ပါသည်။သင်အသုံးပြုနေသောဘရောက်ဆာဗားရှင်းတွင် CSS ပံ့ပိုးမှုအကန့်အသတ်ရှိသည်။အကောင်းဆုံးအတွေ့အကြုံအတွက်၊ အပ်ဒိတ်လုပ်ထားသောဘရောက်ဆာ (သို့မဟုတ် Internet Explorer တွင် လိုက်ဖက်ညီသောမုဒ်ကိုပိတ်ပါ) ကိုအသုံးပြုရန် ကျွန်ုပ်တို့အကြံပြုအပ်ပါသည်။ဤအတောအတွင်း၊ ဆက်လက်ပံ့ပိုးမှုသေချာစေရန်၊ ပုံစံများနှင့် JavaScript မပါဘဲ ဝဘ်ဆိုက်ကို တင်ဆက်ပါမည်။
Toxoplasma gondii သည် ဆဲလ်အတွင်းမှ ပရိုတိုဇန်းကပ်ပါးပိုးတစ်မျိုးဖြစ်ပြီး ရောဂါပိုးရှိအိမ်ရှင်၏ သေးငယ်သောပတ်ဝန်းကျင်ကို ပြုပြင်ပေးကာ ဦးနှောက်အကျိတ်ကြီးထွားမှုဖြစ်ပွားမှုနှင့် ဆက်စပ်နေကြောင်း သိရှိထားသည်။ဤလေ့လာမှုတွင်၊ Toxoplasma ကူးစက်မှုမှ exosomal miRNA-21 သည် ဦးနှောက်အကျိတ်ကြီးထွားမှုကို အားပေးသည်ဟု ကျွန်ုပ်တို့ ယူဆပါသည်။Toxoplasma ပိုးကူးစက်ခံထားရသော BV2 microglia မှ Exosomes များကို သွင်ပြင်လက္ခဏာနှင့် U87 glioma ဆဲလ်များ၏ အတွင်းပိုင်းသို့ ပြောင်းလဲခြင်းကို အတည်ပြုခဲ့သည်။Exosomal microRNA ဖော်ပြချက်ပရိုဖိုင်များကို Toxoplasma gondii နှင့် အကျိတ်အမျိုးအစားခွဲခြင်းနှင့်ဆက်စပ်သော microRNA နှင့် microRNA-21A-5p ၏ခင်းကျင်းမှုများကို အသုံးပြု၍ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခဲ့သည်။exosomes များတွင် miR-21 အဆင့်များနှင့် လူ့ U87 glioma ဆဲလ်များ ပြန့်ပွားမှုအပေါ် exosomes များ၏ အကျိုးသက်ရောက်မှုများကို ပြောင်းလဲခြင်းဖြင့် U87 glioma ဆဲလ်များရှိ အကျိတ်နှင့်ဆက်စပ်သော ဗီဇများ၏ mRNA အဆင့်ဆင့်ကိုလည်း စူးစမ်းလေ့လာခဲ့ပါသည်။Toxoplasma gondii ကူးစက်ခံရသော U87 glioma ဆဲလ်များ၏ exosomes တွင်၊ microRNA-21 ၏ဖော်ပြမှု တိုးလာပြီး antitumor မျိုးဗီဇများ (FoxO1, PTEN, နှင့် PDCD4) ၏လုပ်ဆောင်ချက်ကို လျော့ကျစေသည်။Toxoplasma ကူးစက်ခံရသော BV2 မှရရှိသော exosomes များသည် U87 glioma ဆဲလ်များ ကြီးထွားမှုကို ဖြစ်စေသည်။Exosomes များသည် mouse အကျိတ်ပုံစံတွင် U87 ဆဲလ်များ ကြီးထွားမှုကို လှုံ့ဆော်ပေးသည်။Toxoplasma-infected BV2 microglia တွင် exosomal miR-21 တိုးလာခြင်းသည် U87 glioma ဆဲလ်များတွင် ဆဲလ်ကြီးထွားမှုကို အားပေးသည့်အနေဖြင့် အရေးပါသောအခန်းကဏ္ဍမှ ပါဝင်နိုင်သည်ဟု ကျွန်ုပ်တို့အကြံပြုအပ်ပါသည်။
2018 ခုနှစ်တွင် ကမ္ဘာတစ်ဝှမ်းတွင် အဆင့်မြင့်ကင်ဆာဖြစ်ပွားမှုပေါင်း 18.1 သန်းကျော်ကို စစ်ဆေးတွေ့ရှိခဲ့ပြီး နှစ်စဉ် ဗဟိုအာရုံကြောစနစ်အကျိတ်များ 297,000 ခန့် (အကျိတ်အားလုံး၏ 1.6%) ကို သိရှိနိုင်သည်ဟု ခန့်မှန်းရပါသည်။ယခင်သုတေသနပြုချက်များအရ လူ့ဦးနှောက်အကျိတ်များ ပေါက်ဖွားနိုင်ခြေရှိသည့် အကြောင်းရင်းများတွင် ဓာတုဗေဒပစ္စည်းများ၊ မိသားစုရာဇဝင်နှင့် ဦးခေါင်းကုထုံးနှင့် ရောဂါရှာဖွေရေးကိရိယာများမှ အိုင်ယွန်ဓာတ်ရောင်ခြည်များ ပါဝင်ကြောင်း သိရသည်။သို့သော် ယင်းရောဂါများ ဖြစ်ပွားရသည့် အကြောင်းအရင်း အတိအကျကို မသိရသေးပေ။ကမ္ဘာတစ်ဝှမ်းရှိ ကင်ဆာအားလုံး၏ ခန့်မှန်းခြေ 20% သည် ဗိုင်းရပ်စ်များ၊ ဘက်တီးရီးယားများနှင့် ကပ်ပါးပိုးများ အပါအဝင် ကူးစက်နိုင်သော အေးဂျင့်များကြောင့် ဖြစ်ရသည်။ရောဂါပိုးရှိသော ရောဂါပိုးများသည် DNA ပြုပြင်ခြင်းနှင့် ဆဲလ်လည်ပတ်ခြင်းကဲ့သို့သော လက်ခံဆဲလ်များ၏ မျိုးရိုးဗီဇယန္တရားများကို နှောက်ယှက်ကာ နာတာရှည်ရောင်ရမ်းခြင်းနှင့် ကိုယ်ခံအားစနစ်ကို ပျက်စီးစေနိုင်သည်။
လူ့ကင်ဆာနှင့်ဆက်စပ်နေသော ကူးစက်နိုင်သောအေးဂျင့်များသည် human papillomaviruses နှင့် hepatitis B နှင့် C ဗိုင်းရပ်စ်များအပါအဝင် အဖြစ်အများဆုံးဗိုင်းရပ်စ်ပိုးများဖြစ်သည်။ကပ်ပါးကောင်များသည် လူ့ကင်ဆာဖြစ်ပွားမှုတွင် အလားအလာရှိသော အခန်းကဏ္ဍမှ ပါဝင်နိုင်သည်။Schistosoma၊ Opishorchis viverrini၊ O. felineus၊ Clonorchis sinensis နှင့် Hymenolepis nana ကဲ့သို့သော ကပ်ပါးမျိုးစိတ်များစွာသည် လူသားကင်ဆာ 6,7,8 အမျိုးအစားများတွင် ဆက်စပ်လျှက်ရှိသည်။
Toxoplasma gondii သည် ရောဂါပိုးရှိအိမ်ရှင်ဆဲလ်များ၏ သေးငယ်သောပတ်ဝန်းကျင်ကို ထိန်းညှိပေးသည့် အတွင်းဆဲလ်ပရိုတိုဇန်းတစ်မျိုးဖြစ်သည်။ဤကပ်ပါးပိုးသည် ကမ္ဘာ့လူဦးရေ၏ 30% ခန့်ကို ကူးစက်နိုင်သည်ဟု ခန့်မှန်းရပြီး လူဦးရေ တစ်ခုလုံးကို အန္တရာယ် 9,10 ဖြင့် ကူးစက်နိုင်သည်။Toxoplasma gondii သည် ဗဟိုအာရုံကြောစနစ် (CNS) အပါအဝင် အရေးကြီးသော အင်္ဂါများကို ကူးစက်နိုင်ပြီး အထူးသဖြင့် ခုခံအားကျနိုင်သော လူနာများတွင် ပြင်းထန်သော ဦးနှောက်အမြှေးရောင်နှင့် ဦးနှောက်ရောင်ခြင်းကဲ့သို့သော ပြင်းထန်သောရောဂါများကို ဖြစ်စေသည်။သို့သော်လည်း Toxoplasma gondii သည် ဆဲလ်ကြီးထွားမှုနှင့် ကိုယ်ခံအားတုံ့ပြန်မှုများကို ထိန်းညှိပေးခြင်းဖြင့် ရောဂါကူးစက်ခံရသူ၏ ပတ်ဝန်းကျင်ကို ပြောင်းလဲစေပြီး ရောဂါလက္ခဏာမပြသော နာတာရှည်ရောဂါကူးစက်မှု ၉၊၁၁ ကို ထိန်းသိမ်းပေးနိုင်သည်။စိတ်ဝင်စားစရာကောင်းသည်မှာ၊ T. gondii ပျံ့နှံ့မှုနှင့် ဦးနှောက်အကျိတ်ဖြစ်ပွားမှုကြား ဆက်စပ်မှုကို ထောက်လှမ်းသောကြောင့် အချို့သော အစီရင်ခံစာများက vivo host ပတ်ဝန်းကျင်တွင် နာတာရှည် T. gondii ရောဂါပိုးကူးစက်မှုကြောင့် အကျိတ်အသေးစားပတ်ဝန်းကျင်နှင့် ဆင်တူကြောင်း အစီရင်ခံစာအချို့က ဖော်ပြသည်။
Exosomes ကို အိမ်နီးနားချင်းဆဲလ် ၁၆၊၁၇ မှ ပရိုတင်းများနှင့် နျူကလိယအက်ဆစ်များအပါအဝင် ဇီဝဆိုင်ရာအကြောင်းအရာများကို ပို့ဆောင်ပေးသည့် intercellular communicators အဖြစ် လူသိများသည်။Exosomes သည် အကျိတ်အသေးစားပတ်ဝန်းကျင်ရှိ အကျိတ်ကိုဆန့်ကျင်သော apoptosis၊ angiogenesis နှင့် metastasis ကဲ့သို့သောအကျိတ်ဆိုင်ရာဇီဝဖြစ်စဉ်များကိုလွှမ်းမိုးနိုင်သည်။အထူးသဖြင့်၊ miRNAs (miRNAs)၊ သေးငယ်သော coding မဟုတ်သော RNAs များသည် အရှည် ၂၂ ခုခန့်ရှိသော nucleotides များသည် miRNA-induced silenced complex (miRISC) မှတဆင့် လူ့ mRNA ၏ 30% ကျော်ကို ထိန်းချုပ်သည့် အရေးကြီးသော post-transcriptional gene regulators များဖြစ်သည်။Toxoplasma gondii သည် ကူးစက်ခံရသူများတွင် miRNA ဖော်ပြမှုကို ထိန်းချုပ်ခြင်းဖြင့် ဇီဝဖြစ်စဉ်များကို နှောင့်ယှက်နိုင်သည်။လက်ခံသူ miRNA များတွင် ကပ်ပါးကောင်၏ရှင်သန်မှုဗျူဟာကိုရရှိရန် အိမ်ရှင်ဇီဝဖြစ်စဉ်များကိုထိန်းညှိရန်အတွက် အရေးကြီးသောအချက်ပြမှုများပါရှိသည်။ထို့ကြောင့်၊ T. gondii နှင့် host miRNA ပရိုဖိုင်တွင် အပြောင်းအလဲများကို လေ့လာခြင်းသည် host နှင့် T. gondii အကြား အပြန်အလှန်ဆက်သွယ်မှုကို ပိုမိုရှင်းလင်းစွာ နားလည်ရန် ကူညီပေးနိုင်သည်။အမှန်ကတော့ Thirugnanam et al ။15 မှ T. gondii သည် အကျိတ်ကြီးထွားမှုနှင့်ဆက်စပ်သော သီးခြားအိမ်ရှင် miRNAs များပေါ်တွင် ၎င်း၏အသုံးအနှုန်းကိုပြောင်းလဲခြင်းဖြင့် T. gondii သည် စမ်းသပ်တိရစ္ဆာန်များတွင် gliomas ဖြစ်ပေါ်စေနိုင်ကြောင်း တွေ့ရှိခဲ့သည်။
ဤလေ့လာမှုသည် Toxoplasma BV2 ကူးစက်ခံရသော host microglia တွင် exosomal miR-21 ၏ပြောင်းလဲမှုအပေါ်အလေးပေးသည်။FoxO1/p27 ၏နျူကလိယတွင် ထိန်းသိမ်းထားခြင်းကြောင့် U87 glioma ဆဲလ်များ ကြီးထွားမှုတွင် ပြောင်းလဲလာသော exosomal miR-21 ၏ အခန်းကဏ္ဍကို ကျွန်ုပ်တို့ တွေ့ရှိခဲ့သည်။
BV2 မှရရှိသော Exosomes များကို differential centrifugation ဖြင့် ရယူခဲ့ပြီး ဆဲလ်လူလာအစိတ်အပိုင်းများ သို့မဟုတ် အခြား vesicles များ ညစ်ညမ်းခြင်းမှ ကာကွယ်ရန် နည်းလမ်းအမျိုးမျိုးဖြင့် အတည်ပြုခဲ့သည်။SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) သည် BV2 ဆဲလ်များနှင့် exosomes (ပုံ 1A) မှထုတ်ယူသော ပရိုတိန်းများအကြား ကွဲပြားသောပုံစံများကို ပြသခဲ့ပြီး၊ အနောက်တိုင်းရှိ exosomal ပရိုတင်းအမှတ်အသားများကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းဖြင့် Alix ၏ပါဝင်မှုအတွက် နမူနာများကို အကဲဖြတ်ခဲ့သည်။Alix တံဆိပ်တပ်ခြင်းကို exosome ပရိုတင်းများတွင်တွေ့ရှိရသော်လည်း BV2 ဆဲလ် lysate ပရိုတင်းများ (ပုံ. 1B) တွင်မတွေ့ပါ။ထို့အပြင် BV2 မှရရှိသော exosomes များမှ သန့်စင်ထားသော RNA ကို bioanalyzer သုံးပြီး ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခဲ့သည်။ယုံကြည်စိတ်ချရသော သန့်စင်မှုကို ညွှန်ပြသော exosomal RNA ရွှေ့ပြောင်းမှုပုံစံတွင် 18S နှင့် 28S ribosomal subunits များကို တွေ့ရခဲပါသည်။နောက်ဆုံးတွင်၊ ထုတ်လွှင့်မှုအီလက်ထရွန်အဏုကြည့်မှန်ဘီလူးများသည် လေ့လာတွေ့ရှိထားသော exosomes များသည် 60-150 nm အရွယ်အစားခန့်ရှိပြီး exosome morphology ၏ပုံမှန်ပုံစံခွက်နှင့်တူကြောင်းပြသခဲ့သည် (ပုံ 1D)။
BV2 ဆဲလ်များမှ ဆင်းသက်လာသော exosome များ၏ လက္ခဏာရပ်များ။(က) ဘေးကင်းရေး အချက်အလက်စာရွက် စာမျက်နှာ။ပရိုတင်းများကို BV2 ဆဲလ်များ သို့မဟုတ် BV2 မှရရှိသော exosomes များမှ ခွဲထုတ်ထားသည်။ပရိုတင်းပုံစံများသည် ဆဲလ်များနှင့် exosomes များကြားတွင် ကွဲပြားသည်။(ခ) exosomal အမှတ်အသား (Alix) ၏ အနောက်တိုင်း ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်း။(ဂ) BV2 ဆဲလ်များမှ သန့်စင်ထားသော RNA နှင့် BV2 မှရရှိသော exosomes များကို bioanalyzer ဖြင့် အကဲဖြတ်ခြင်း။ထို့ကြောင့် BV2 ဆဲလ်ရှိ 18S နှင့် 28S ribosomal subunits များကို exosomal RNA တွင် တွေ့ရခဲသည်။(ဃ) Transmission electron microscopy သည် BV2 ဆဲလ်များမှ သီးခြားခွဲထုတ်ထားသော exosomes 2% uranyl acetate ဖြင့် အနုတ်လက္ခဏာဖြင့် စွန်းထင်းနေသည်ကို ပြသခဲ့သည်။Exosomes များသည် ခန့်မှန်းခြေအားဖြင့် 60-150 nm အရွယ်အစားရှိပြီး ခွက်ပုံသဏ္ဍာန် (Song နှင့် Jung၊ မထုတ်ဝေရသေးသော အချက်အလက်)။
BV2 မှရရှိသော exosomes များကို U87 human glioma ဆဲလ်များအတွင်းသို့ confocal microscopy သုံးပြီး ဆယ်လူလာအတွင်းထည့်သွင်းခြင်းကို လေ့လာတွေ့ရှိခဲ့သည်။PKH26 တံဆိပ်တပ်ထားသော exosomes များကို U87 ဆဲလ်များ၏ ဆိုက်တိုပလပ်ဇမ်တွင် နေရာချထားပါသည်။BV2 မှရရှိသော exosomes များကို လက်ခံဆဲလ်များဖြင့် အတွင်းပိုင်းနှင့် လက်ခံရရှိသည့်ဆဲလ်များ၏ ပတ်ဝန်းကျင်ကို လွှမ်းမိုးနိုင်ကြောင်း ညွှန်ပြသော DAPI (ပုံ 2A) ဖြင့် စွန်းထင်းနေသော နျူကလိယအား။
BV2 မှရရှိသော exosomes များကို U87 glioma ဆဲလ်များနှင့် Toxoplasma RH ဖြင့် ကူးစက်ခံရသော BV2 မှရရှိသော exosomes များအဖြစ် U87 glioma ဆဲလ်များ ပြန့်ပွားမှုကို လှုံ့ဆော်ပေးသည်။(က) ဖော်မြူလာစကုပ်ဖြင့်တိုင်းတာသော U87 ဆဲလ်များက ဖုံးလွှမ်းထားသော Exosomes များ။U87 glioma ဆဲလ်များကို PKH26 (အနီရောင်) တံဆိပ်တပ်ထားသော exosomes များဖြင့် ပေါက်ဖွားခဲ့သည် သို့မဟုတ် ထိန်းမနိုင်သိမ်းမရ 24 နာရီကြာအောင် ပြုလုပ်ထားသည်။နျူကလိယအား DAPI (အပြာ) ဖြင့် စွန်းထင်းပြီးနောက် အနုအဏုကြည့်မှန်ပြောင်း (စကေးဘား- 10 μm၊ x 3000) အောက်တွင် စောင့်ကြည့်လေ့လာခဲ့သည်။(ခ) U87 glioma ဆဲလ်ပွားခြင်းကို ဆဲလ်ပွားခြင်းဆိုင်ရာ စစ်ဆေးမှုဖြင့် ဆုံးဖြတ်ခဲ့သည်။U87 glioma ဆဲလ်များကို သတ်မှတ်အချိန်အတွက် exosomes ဖြင့် ကုသခဲ့သည်။ *P < 0.05 ကို Student's t test ဖြင့် ရရှိခဲ့သည်။ *P < 0.05 ကို Student's t test ဖြင့် ရရှိခဲ့သည်။ *P < 0,05 получено по t-критерию Стьюдента ။ ကျောင်းသား၏ t-test ဖြင့် *P < 0.05 ။ *P < 0.05 通过学生t 检验获得။ *P < 0.05 * P < 0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента ။ * ကျောင်းသား၏ t-test ကို အသုံးပြု၍ ရရှိသော P < 0.05 ။
BV2 မှရရှိသော exosomes များကို U87 glioma ဆဲလ်များအတွင်း ထည့်သွင်းခြင်းအား အတည်ပြုပြီးနောက်၊ လူ့ glioma ဆဲလ်များ ဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှုတွင် BV2 မှရရှိသော Toxoplasma-derived exosomes များ၏ အခန်းကဏ္ဍကို စုံစမ်းစစ်ဆေးရန်အတွက် ကျွန်ုပ်တို့သည် ဆဲလ်ပြန့်ပွားမှုဆိုင်ရာ စစ်ဆေးမှုများကို လုပ်ဆောင်ခဲ့ပါသည်။T. gondii-ကူးစက်ခံထားရသော BV2 ဆဲလ်များမှ exosomes များဖြင့် U87 ဆဲလ်များကို ကုသခြင်းသည် T. gondii-infected BV2 မှရရှိသော exosome များသည် ထိန်းချုပ်မှုနှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက U87 ဆဲလ်များ သိသိသာသာ ပြန့်ပွားမှုကို ဖြစ်ပေါ်စေသည် (ပုံ။ 2B)။
ထို့အပြင်၊ Toxoplasma မှ exosomes များ ပြန့်ပွားမှု အဆင့်အမြင့်ဆုံး ဖြစ်စေသောကြောင့် U118 ဆဲလ်များ ကြီးထွားမှု U87 နှင့် တူညီသော ရလဒ်များ ရရှိခဲ့ပါသည်။ဤအချက်အလက်များအပေါ်အခြေခံ၍ BV2 မှရရှိသော Toxoplasma ပိုးဝင်သော exosomes များသည် glioma ဆဲလ်များတိုးပွားလာမှုတွင် အရေးကြီးသောအခန်းကဏ္ဍမှပါဝင်နေကြောင်း ကျွန်ုပ်တို့ညွှန်ပြနိုင်ပါသည်။
အကျိတ်ဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှုအပေါ် Toxoplasma-ကူးစက်ခံရသော BV2-ရရှိသည့် exosomes ၏အကျိုးသက်ရောက်မှုကို စုံစမ်းစစ်ဆေးရန်၊ ကျွန်ုပ်တို့သည် Xenograft မော်ဒယ်အတွက် ကိုယ်လုံးတီးကြွက်များထဲသို့ U87 glioma ဆဲလ်များကို ထိုးသွင်းပြီး BV2-ရရှိသော exosomes သို့မဟုတ် RH-infected BV2-ရရှိထားသော exosomes ကို ထိုးသွင်းပါသည်။အကျိတ်များသည် ၁ ပတ်အကြာတွင် ထင်ရှားပေါ်လွင်လာပြီးနောက်၊ စမ်းသပ်ဆဲ ကြွက် ၅ ကောင်စီကို တူညီသည့် အစမှတ်ကို ဆုံးဖြတ်ရန် အကျိတ်အရွယ်အစားအလိုက် ခွဲကာ အကျိတ်အရွယ်အစားကို ၂၂ ရက်ကြာ တိုင်းထွာခဲ့သည်။
U87 xenograft မော်ဒယ်ဖြင့် ကြွက်များတွင် BV2 မှရရှိသော RH-infected exosome အုပ်စု (ပုံ. 3A,B) တွင် သိသိသာသာ ပိုကြီးသော အကျိတ်အရွယ်အစားနှင့် အလေးချိန်ကို တွေ့ရှိခဲ့သည်။အခြားတစ်ဖက်တွင်၊ BV2 မှရရှိသော exosome အုပ်စုနှင့် exosome ကုသမှုပြီးနောက် ထိန်းချုပ်မှုအုပ်စုကြားတွင် အကျိတ်အရွယ်အစားမှာ သိသာထင်ရှားသော ကွာခြားချက်မရှိပါ။ထို့အပြင်၊ glioma ဆဲလ်များနှင့် exosomes များဖြင့် ထိုးသွင်းထားသော ကြွက်များသည် RH ပိုးကူးစက်ခံထားရသော BV2 မှရရှိသော exosomes အုပ်စု (ပုံ. 3C) တွင် အကြီးဆုံးအကျိတ်ပမာဏကို အမြင်အာရုံဖြင့် ပြသသည်။ဤရလဒ်များသည် BV2 မှရရှိသော Toxoplasma-infected exosomes သည် mouse အကျိတ်ပုံစံတစ်ခုတွင် glioma ကြီးထွားမှုကို ဖြစ်စေကြောင်း သက်သေပြနေသည်။
U87 xenograft mouse မော်ဒယ်တွင် BV2 မှရရှိသော exosomes ၏ Oncogenesis (AC)။အကျိတ်အရွယ်အစား (A) နှင့် ကိုယ်အလေးချိန် (B) သည် BV2 မှရရှိသော RH ရောဂါပိုးရှိသော exosomes ဖြင့်ကုသထားသော BALB/c ကိုယ်တုံးလုံးကြွက်များတွင် သိသိသာသာတိုးလာသည်။Matrigel အရောအနှောတွင် ဆိုင်းငံ့ထားသော 1 x 107 U87 ဆဲလ်များဖြင့် BALB/c nude ကြွက်များ (C) ကို အရေပြားဖြင့် ထိုးသွင်းခဲ့သည်။ဆေးထိုးပြီး ခြောက်ရက်အကြာတွင် BV2 မှရရှိသော exosome 100 μg ကို ကြွက်များတွင် ကုသခဲ့သည်။အကျိတ်အရွယ်အစားနှင့် အလေးချိန်တို့ကို သတ်မှတ်ရက်များနှင့် ပူဇော်ပြီးနောက် အသီးသီးတိုင်းတာသည်။ *P < 0.05 ။ *P < 0.05 ။ *Р < 0.05 ။ *P < 0.05 ။ *P < 0.05 ။ *P < 0.05 ။ *Р < 0.05 ။ *P < 0.05 ။
ဒေတာများတွင် 37 miRNAs (16 overexpressed နှင့် 21 နှိမ့်ချဖော်ပြသည်) သည် Toxoplasma RH strain (ပုံ 4A) ကိုကူးစက်ပြီးနောက် microglia တွင် သိသာထင်ရှားစွာ ပြောင်းလဲသွားသည်ကို တွေ့ရပါသည်။ပြောင်းလဲထားသော miRNA များကြားတွင် miR-21 ၏ ဆက်စပ်ဖော်ပြမှုအဆင့်ကို BV2 မှရရှိသော exosomes များ၊ BV2 နှင့် U87 ဆဲလ်များဖြင့် ကုသထားသော exosomes များတွင် အချိန်နှင့်တစ်ပြေးညီ RT-PCR မှ အတည်ပြုခဲ့သည်။miR-21 ၏ဖော်ပြချက်သည် Toxoplasma gondii (RH strain) (ပုံ 4B) တွင်ကူးစက်ခံရသော BV2 ဆဲလ်များမှ exosomes သိသိသာသာတိုးလာသည်ကိုပြသခဲ့သည်။BV2 နှင့် U87 ဆဲလ်များရှိ miR-21 ၏ ဆက်စပ်ဖော်ပြမှုအဆင့်များသည် ပြောင်းလဲလာသော exosomes (ပုံ 4B) ကို စားသုံးပြီးနောက် တိုးလာသည်။အကျိတ်လူနာများနှင့် Toxoplasma gondii (ME49 strain) ကူးစက်ခံရသော ကြွက်များ၏ ဦးနှောက်တစ်ရှူးများတွင် miR-21 ဖော်ပြမှု၏ နှိုင်းရအဆင့်များသည် ထိန်းချုပ်မှုထက် မြင့်မားနေသည်၊ အသီးသီး (ပုံ. 4C)။ဤရလဒ်များသည် ဗီထရိုနှင့် ဗိုင်းဗိုရှိ microRNA များ၏ ကြိုတင်ခန့်မှန်းထားသော နှင့် အတည်ပြုထားသော microRNA များ၏ ဖော်ပြမှုအဆင့်များအကြား ကွဲပြားမှုများနှင့် ဆက်စပ်နေသည်။
Toxoplasma gondii (RH) ကူးစက်ခံရသော microglia တွင် exosomal miP-21a-5p ၏ဖော်ပြချက်ပြောင်းလဲမှု(က) T. gondii RH ကူးစက်ခံရပြီးနောက် ကိုယ်ခံစွမ်းအား သို့မဟုတ် အကျိတ်များ ဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှုနှင့်ဆက်စပ်သော siRNA တွင် သိသာထင်ရှားသောပြောင်းလဲမှုများကို ပြသသည်။(ခ) Relative miR-21 ဖော်ပြမှုအဆင့်များကို BV2 မှရရှိသော exosomes၊ BV2-treated exosomes နှင့် U87 ဆဲလ်များတွင် အချိန်နှင့်တပြေးညီ RT-PCR မှ ရှာဖွေတွေ့ရှိခဲ့သည်။(ဂ) Relative miR-21 ဖော်ပြမှုအဆင့်ကို အကျိတ်လူနာများ၏ ဦးနှောက်တစ်ရှူးများ (N=3) နှင့် Toxoplasma gondii (ME49 strain) (N=3) ရှိသော ကြွက်များတွင် တွေ့ရှိခဲ့သည်။ *P < 0.05 ကို Student's t test ဖြင့် ရရှိခဲ့သည်။ *P < 0.05 ကို Student's t test ဖြင့် ရရှိခဲ့သည်။ *P < 0,05 было получено с помощью t-критерия Стьюдента ။ *P < 0.05 ကို Student's t-test ကို အသုံးပြု၍ ရရှိခဲ့သည်။ *P < 0.05 通过学生t 检验获得။ *P < 0.05 * P < 0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента ။ * ကျောင်းသား၏ t-test ကို အသုံးပြု၍ ရရှိသော P < 0.05 ။
RH-ကူးစက်ခံထားရသော BV2 ဆဲလ်များမှ Exosomes များသည် vivo နှင့် vitro တို့တွင် gliomas ကြီးထွားမှုကို ဖြစ်စေသည် (ပုံ။ 2၊ 3)။သက်ဆိုင်ရာ mRNAs များကို ရှာဖွေတွေ့ရှိရန်၊ ကျွန်ုပ်တို့သည် BV2 သို့မဟုတ် RH BV2 မှရရှိသော exosomes ရှိသော exosomes ရှိသော U87 ဆဲလ်များရှိ forkhead O1 (FoxO1), PTEN နှင့် forkhead box O1 (FoxO1), PTEN နှင့် programmed cell death 4 (PDCD4) ကို စစ်ဆေးထားပါသည်။ဇီဝနည်းပညာဆိုင်ရာ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုတွင် FoxO1၊ PTEN နှင့် PDCD4 ဗီဇများ အပါအဝင် အကျိတ်နှင့်ဆက်စပ်သော ဗီဇများစွာတွင် miR-2121,22 binding sites များရှိကြောင်း ပြသခဲ့သည်။BV2 မှရရှိသော exosomes (ပုံ 5A) နှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက RH ပိုးရှိသော BV2 မှရရှိသော exosomes တွင် mRNA ၏ antitumor ပစ်မှတ်မျိုးဗီဇအဆင့်များ လျော့နည်းသွားသည်။FoxO1 သည် BV2 မှရရှိသော exosomes (ပုံ 5B) နှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက RH ပိုးဝင်သော BV2 မှရရှိသော exosomes များတွင် ပရိုတင်းပမာဏ လျော့ကျသွားသည်ကို ပြသခဲ့သည်။ဤရလဒ်များအပေါ်အခြေခံ၍ RH-infected BV2 မှရရှိသော exosomes များသည် anti-oncogenic မျိုးဗီဇများကို ထိန်းညှိပေးပြီး အကျိတ်ကြီးထွားမှုတွင် ၎င်းတို့၏အခန်းကဏ္ဍကို ထိန်းသိမ်းထားကြောင်း ကျွန်ုပ်တို့အတည်ပြုနိုင်ပါသည်။
Toxoplasma RH-ကူးစက်ခံထားရသော BV2-ဆင်းသက်လာသော exosomes များသည် Toxoplasma RH-infected BV2-derived exosomes ဖြင့် U87 glioma ဆဲလ်များရှိ antitumor မျိုးဗီဇများကို ဖိနှိပ်မှုကို ဖြစ်စေသည်။(က) PBS exosomes နှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက T. gondii RH-infected BV2 မှ ဆင်းသက်လာသော exosomes များတွင် FoxO1၊ PTEN နှင့် PDCD4 ၏ အချိန်နှင့်တပြေးညီ PCR ၊β-actin mRNA ကို ထိန်းချုပ်မှုအဖြစ် အသုံးပြုခဲ့သည်။(ခ) FoxO1 စကားရပ်ကို အနောက်တိုင်း blotting နှင့် densitometry ဒေတာ ImageJ ပရိုဂရမ်ကို အသုံးပြု၍ စာရင်းအင်းအကဲဖြတ်ခြင်းမှ ဆုံးဖြတ်ခဲ့သည်။ *P < 0.05 ကို Student's t test ဖြင့် ရရှိခဲ့သည်။ *P < 0.05 ကို Student's t test ဖြင့် ရရှိခဲ့သည်။ *P < 0,05 было получено с помощью t-критерия Стьюдента ။ *P < 0.05 ကို Student's t-test ကို အသုံးပြု၍ ရရှိခဲ့သည်။ *P < 0.05 通过学生t 检验获得။ *P < 0.05 * P < 0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента ။ * ကျောင်းသား၏ t-test ကို အသုံးပြု၍ ရရှိသော P < 0.05 ။
အကျိတ်ဆက်စပ်သော မျိုးရိုးဗီဇ စည်းမျဉ်းအပေါ် miP-21 ၏ exosomes ၏ အကျိုးသက်ရောက်မှုကို နားလည်ရန် U87 ဆဲလ်များသည် Lipofectamine 2000 ကို အသုံးပြု၍ miP-21 ၏ inhibitor ဖြင့် ကူးစက်ခံရပြီး ဆဲလ်များကို ကူးပြောင်းပြီးနောက် 24 နာရီအကြာတွင် ရိတ်သိမ်းခဲ့သည်။miR-21 inhibitors ဖြင့် ကူးစက်သော ဆဲလ်များတွင် FoxO1 နှင့် p27 ဖော်ပြမှုအဆင့်များကို qRT-PCR (ပုံ 6A,B) သုံးပြီး BV2 မှရရှိသော exosomes ဖြင့် ကုသသည့်ဆဲလ်များနှင့် နှိုင်းယှဉ်ခဲ့သည်။miR-21 inhibitor ၏ U87 ဆဲလ်များထဲသို့ လွှဲပြောင်းခြင်းသည် FoxO1 နှင့် p27 ဖော်ပြချက်အား သိသိသာသာ လျှော့ချပေးသည် (ပုံ။ 6)။
RH-ကူးစက်ခံထားရသော exosomal BV2-ဆင်းသက်လာသော miP-21 သည် U87 glioma ဆဲလ်များရှိ FoxO1/p27 ဖော်ပြမှုကို ပြောင်းလဲထားသည်။U87 ဆဲလ်များသည် Lipofectamine 2000 ကို အသုံးပြု၍ miP-21 inhibitor ဖြင့် ကူးစက်ခံရပြီး ဆဲလ်များ ကူးပြောင်းပြီးနောက် 24 နာရီအတွင်း ရိတ်သိမ်းခဲ့သည်။miR-21 inhibitors ဖြင့် ကူးစက်သော ဆဲလ်များတွင် FoxO1 နှင့် p27 ဖော်ပြမှုအဆင့်များကို qRT-PCR (A, B) အသုံးပြုထားသော BV2 မှရရှိသော exosomes ဖြင့် ကုသထားသော ဆဲလ်အဆင့်များနှင့် နှိုင်းယှဉ်ခဲ့သည်။
အိမ်ရှင်၏ခုခံအားတုံ့ပြန်မှုမှလွတ်မြောက်ရန် Toxoplasma ကပ်ပါးကောင်သည် တစ်ရှူးအိတ်အဖြစ်သို့ ပြောင်းလဲသွားသည်။၎င်းတို့သည် အိမ်ရှင်၏ သက်တမ်းတစ်လျှောက်လုံး ဦးနှောက်၊ နှလုံးနှင့် အရိုးကြွက်သားများ အပါအဝင် အမျိုးမျိုးသော တစ်ရှူးများကို ကပ်ပါးစေပြီး အိမ်ရှင်၏ ကိုယ်ခံအား တုံ့ပြန်မှုကို ပြုပြင်ပေးသည်။ထို့အပြင်၊ ၎င်းတို့သည် ဆဲလ်လည်ပတ်မှုနှင့် လက်ခံဆဲလ်များ၏ apoptosis ကို ထိန်းညှိနိုင်ပြီး ၎င်းတို့၏ ကြီးထွားမှု 14,24 ကို မြှင့်တင်နိုင်သည်။Toxoplasma gondii အများစုသည် ဦးနှောက် microglia အပါအဝင် host dendritic ဆဲလ်များ၊ neutrophils နှင့် monocyte/macrophage မျိုးရိုးကို ကူးစက်သည်။Toxoplasma gondii သည် M2 phenotype ၏ macrophages ၏ကွဲပြားမှုကို ဖြစ်ပေါ်စေပြီး ရောဂါပိုးကူးစက်ပြီးနောက် ဒဏ်ရာအနာကျက်ခြင်းကို သက်ရောက်စေကာ hypervascularization နှင့် granulomatous fibrosis တို့နှင့်လည်း ဆက်စပ်နေသည်။Toxoplasma ကူးစက်မှု၏ အပြုအမူဆိုင်ရာ ရောဂါဖြစ်ပွားမှုသည် အကျိတ်ကြီးထွားမှုနှင့် ဆက်နွှယ်သည့် အမှတ်အသားများနှင့် ဆက်စပ်နေနိုင်သည်။Toxoplasma မှ ထိန်းချုပ်ထားသော ရန်လိုသောပတ်ဝန်းကျင်သည် သက်ဆိုင်ရာ ကင်ဆာရောဂါနှင့် ဆင်တူနိုင်သည်။ထို့ကြောင့် Toxoplasma ပိုးကူးစက်မှုသည် ဦးနှောက်အကျိတ်များ ဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်စေရန် အထောက်အကူဖြစ်သင့်သည်ဟု ယူဆနိုင်သည်။တကယ်တော့ Toxoplasma ကူးစက်မှုနှုန်း မြင့်မားတဲ့ ဦးနှောက်အကျိတ်အမျိုးမျိုးရှိတဲ့ လူနာတွေရဲ့ သွေးရည်ကြည်မှာ အစီရင်ခံထားပါတယ်။ထို့အပြင်၊ Toxoplasma gondii သည် အခြားသော ကင်ဆာဖြစ်စေသော အကျိုးသက်ရောက်မှုတစ်ခု ဖြစ်နိုင်ပြီး အခြားသော ကူးစက်တတ်သော ကင်ဆာဖြစ်စေသည့် ဦးနှောက်အကျိတ်များ ဖြစ်ပေါ်လာစေရန် ပေါင်းစပ်လုပ်ဆောင်ပေးနိုင်သည်။ဤကိစ္စတွင်၊ P. falciparum နှင့် Epstein-Barr ဗိုင်းရပ်စ်သည် Burkitt's lymphoma ၏ဖွဲ့စည်းခြင်းကို ပေါင်းစပ်ပါဝင်ကူညီကြောင်း သတိပြုသင့်သည်။
ကင်ဆာသုတေသနနယ်ပယ်တွင် exosomes များ၏ အခန်းကဏ္ဍအား ထိန်းညှိပေးသည့် အခန်းကဏ္ဍကို အကျယ်တဝင့် စုံစမ်းစစ်ဆေးလျက်ရှိသည်။သို့သော်၊ ကပ်ပါးကောင်များနှင့် ကူးစက်ခံရသူများကြားတွင် exosomes အခန်းကဏ္ဍကို နားမလည်သေးပါ။ယခုအချိန်အထိ လျှို့ဝှက်ပရိုတိန်းများအပါအဝင် အမျိုးမျိုးသော ထိန်းညှိသူများသည် ပရိုတိုဇိုးကပ်ပါးကောင်များသည် အိမ်ရှင်တိုက်ခိုက်မှုကို တွန်းလှန်ပြီး ရောဂါပိုးကူးစက်မှုကို တည်တံ့စေသည့် ဇီဝဖြစ်စဉ်များကို ရှင်းပြထားသည်။မကြာသေးမီက၊ ပရိုတိုဇိုးန်နှင့် ဆက်နွယ်သော မိုက်ခရိုဝေဇဲလ်များနှင့် ၎င်းတို့၏ microRNA များသည် လက်ခံဆဲလ်များနှင့် ၎င်းတို့၏ ရှင်သန်မှုအတွက် အဆင်ပြေသော ပတ်ဝန်းကျင်ကို ဖန်တီးရန် ကြီးထွားလာသော အယူအဆတစ်ခု ရှိလာခဲ့သည်။ထို့ကြောင့်၊ ပြောင်းလဲလာသော exosomal miRNAs နှင့် glioma ဆဲလ်များ ပြန့်ပွားမှုကြား ဆက်နွယ်မှုကို ရှာဖွေရန် နောက်ထပ်လေ့လာမှုများ လိုအပ်ပါသည်။MicroRNA ပြောင်းလဲခြင်း (အစုအဝေးမျိုးဗီဇ miR-30c-1၊ miR-125b-2၊ miR-23b-27b-24-1 နှင့် miR-17-92) သည် toxoplasma-ကူးစက်ခံထားရသော လူသား macrophages တွင် STAT3 မြှင့်တင်သူနှင့် ချိတ်ဆက်သည်၊ ထိန်းညှိပေးပြီး ဆန့်ကျင်စေသည် - Toxoplasma gondii ရောဂါပိုးကို တုံ့ပြန်ရာတွင် apoptosisToxoplasma ပိုးဝင်ခြင်းသည် များစွာသော hyperproliferative ရောဂါများ 30 နှင့်ဆက်စပ်နေသည့် miR-17-5p နှင့် miR-106b-5p တို့ကို တိုးပွားစေသည်။Toxoplasma ကူးစက်မှုမှ ထိန်းညှိထားသော အိမ်ရှင် miRNA များသည် ကပ်ပါးကောင်များ ရှင်သန်မှုအတွက် အရေးကြီးသော မော်လီကျူးများဖြစ်ကြောင်းနှင့် အရင်းခံဇီဝဗေဒဆိုင်ရာ အပြုအမူများတွင် ရောဂါဖြစ်ပွားစေမည့် အရေးပါသော မော်လီကျူးများဖြစ်ကြောင်း ဤအချက်အလက်များက အကြံပြုအပ်ပါသည်။
ပြောင်းလဲထားသော miRNA များသည် gliomas အပါအဝင် ကင်ဆာဆဲလ်များ၏ အစပြုချိန်နှင့် ကြီးထွားစဉ်အတွင်း အပြုအမူအမျိုးမျိုးကို လွှမ်းမိုးနိုင်သည်- ကြီးထွားမှုအချက်ပြမှုများ၏ မိမိကိုယ်ကို ဖူလုံမှု၊ ကြီးထွားမှုကို ဟန့်တားနိုင်သော အချက်ပြမှုများကို အာရုံမခံနိုင်မှု၊ apoptosis ရှောင်လွှဲမှု၊ အကန့်အသတ်မရှိ ပုံတူပွားနိုင်သောအလားအလာ၊ angiogenesis၊ ကျူးကျော်မှုနှင့် ပျံ့နှံ့ခြင်းနှင့် ရောင်ရမ်းခြင်း။glioma တွင်၊ ပြောင်းလဲထားသော miRNAs များကို ဖော်ပြမှု ပရိုဖိုင်းလေ့လာမှုများစွာတွင် တွေ့ရှိခဲ့သည်။
လက်ရှိလေ့လာမှုတွင်၊ toxoplasma ပိုးရှိသောအိမ်ရှင်ဆဲလ်များတွင် miRNA-21 ၏မြင့်မားသောအသုံးအနှုန်းကိုအတည်ပြုခဲ့သည်။miR-21 သည် gliomas၊ 33 အပါအဝင် အစိုင်အခဲအကျိတ်များတွင် မကြာခဏဖော်ပြလေ့ရှိသော microRNAs များထဲမှတစ်ခုအဖြစ် သတ်မှတ်ဖော်ထုတ်ထားပြီး ၎င်း၏အသုံးအနှုန်းသည် glioma ၏အဆင့်နှင့် ဆက်စပ်နေသည်။စုဆောင်းထားသော အထောက်အထားများအရ miR-21 သည် glioma ကြီးထွားမှုကို ဆန့်ကျင်သည့်အချက်အဖြစ် လုပ်ဆောင်သည့် ဆန်းသစ်သော oncogene ဖြစ်ပြီး လူ့ဦးနှောက်နှင့် ပလာစမာများတွင် အလွန်အကျွံဖော်ပြနေခြင်းကို အကြံပြုထားသည်။စိတ်ဝင်စားစရာမှာ၊ glioma ဆဲလ်များနှင့် တစ်ရှူးများတွင် miR-21 မလှုပ်ရှားခြင်းသည် caspase-မူတည်သော apoptosis ကြောင့် ဆဲလ်ပြန့်ပွားမှုကို ဟန့်တားစေသည်။miR-21 ကြိုတင်ခန့်မှန်းထားသောပစ်မှတ်များ၏ ဇီဝအချက်အလက်များကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းသည် miR-2121 binding site အပါအဝင် ပရိုဂရမ်လုပ်ထားသော ဆဲလ်အသေ 4 (PDCD4)၊ tropomyosin (TPM1)၊ PTEN နှင့် forkhead box O1 (FoxO1) အပါအဝင် apoptosis လမ်းကြောင်းများနှင့် ဆက်စပ်နေသော အကျိတ်များကို နှိမ်နင်းပေးသည့် ဗီဇများစွာကို ဖော်ထုတ်ပြသခဲ့သည်။.22.38.
ကူးယူဖော်ပြသည့်အချက်များထဲမှတစ်ခုအနေဖြင့် FoxO1 (FoxO) သည် လူ့ကင်ဆာအမျိုးအစားအမျိုးမျိုး၏ဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှုတွင်ပါဝင်ပြီး p21၊ p27၊ Bim နှင့် FasL40 ကဲ့သို့သောအကျိတ်ဖိနှိပ်သည့်မျိုးဗီဇများ၏ဖော်ပြမှုကိုထိန်းညှိပေးနိုင်သည်။FoxO1 သည် ဆဲလ်ကြီးထွားမှုကို တားဆီးရန် p27 ကဲ့သို့သော ဆဲလ်လည်ပတ်မှုကို တားဆီးပေးသည့်အရာများကို ချည်နှောင်ကာ အသက်သွင်းနိုင်သည်။ထို့အပြင်၊ FoxO1 သည် PI3K/Akt အချက်ပြခြင်း၏ အဓိကအကျိုးသက်ရောက်သူဖြစ်ပြီး p2742 စာသားမှတ်တမ်းကို အသက်သွင်းခြင်းဖြင့် ဆဲလ်လည်ပတ်မှုတိုးတက်မှုနှင့် ဆဲလ်ကွဲပြားခြင်းကဲ့သို့သော ဇီဝဖြစ်စဉ်များစွာကို ထိန်းညှိပေးသည်။
နိဂုံးချုပ်အားဖြင့်၊ Toxoplasma ပိုးရှိသော microglia မှ ဆင်းသက်လာသော exosomal miR-21 သည် glioma ဆဲလ်များ၏ ကြီးထွားမှုထိန်းညှိမှုတစ်ခုအဖြစ် အရေးကြီးသောအခန်းကဏ္ဍမှ ပါဝင်နိုင်သည် (ပုံ။ 7)။သို့သော်လည်း exosomal miR-21၊ ပြောင်းလဲလာသော Toxoplasma ကူးစက်မှုနှင့် glioma ကြီးထွားမှုကြား တိုက်ရိုက်ဆက်စပ်မှုကို ရှာဖွေရန် နောက်ထပ်လေ့လာမှုများ လိုအပ်ပါသည်။ဤရလဒ်များသည် Toxoplasma ကူးစက်မှုနှင့် glioma ဖြစ်ပွားမှုကြား ဆက်နွယ်မှုကို လေ့လာရန်အတွက် အစပြုသည့်အချက်ကို ပံ့ပိုးပေးမည်ဟု မျှော်လင့်ပါသည်။
ဤလေ့လာမှုတွင် glioma (ဦးနှောက်) carcinogenesis ၏ ယန္တရားပုံကြမ်းကို အဆိုပြုထားသည်။စာရေးသူသည် PowerPoint 2019 (Microsoft, Redmond, WA) တွင်ဆွဲသည်။
တိရစ္ဆာန်များအသုံးပြုခြင်းအပါအဝင် ဤလေ့လာမှုရှိ စမ်းသပ်ဆဲပရိုတိုကောအားလုံးသည် ဆိုးလ်အမျိုးသားတက္ကသိုလ် တိရစ္ဆာန်စောင့်ရှောက်ရေးနှင့် အသုံးပြုသူကော်မတီ၏ စံကျင့်ဝတ်ဆိုင်ရာ လမ်းညွှန်ချက်များနှင့်အညီ ဆိုးလ်အမျိုးသားဆေးတက္ကသိုလ်ကျောင်း၏ Institutional Review Board မှ အတည်ပြုခဲ့သည် (IRB နံပါတ် SNU- ၁၅၀၇၁၅)။စာ-၂)။ARRIVE အကြံပြုချက်များနှင့်အညီ စမ်းသပ်မှုလုပ်ထုံးလုပ်နည်းများအားလုံးကို ဆောင်ရွက်ခဲ့ပါသည်။
BV2 mouse microglia နှင့် U87 human glioma ဆဲလ်များကို Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM; Welgene, Seoul, Korea) နှင့် Roswell Park Memorial Institute's Medium (RPMI; Welgene) အသီးသီး၊ တစ်ခုစီတွင် 10% သန္ဓေသား bovine serum, 4 mM l- glutamine၊ 0.2 mM ပင်နီဆီလင်နှင့် 0.05 mM streptomycin။ဆဲလ်များကို 37°C တွင် 5% CO2 ပါသည့် incubator တွင် မွေးမြူထားသည်။နောက်ထပ် glioma ဆဲလ်လိုင်း U118 ကို U87 ဆဲလ်များနှင့် နှိုင်းယှဉ်ရန်အတွက် အသုံးပြုခဲ့သည်။
T. gondii-infected RH နှင့် ME49 မျိုးကွဲများမှ exosomes များကိုခွဲထုတ်ရန်အတွက် 3-4 ရက်ကြိုတင်ထိုးသွင်းထားသော 6 ပတ်သား BALB/c ကြွက်များ၏ဝမ်းဗိုက်အတွင်းမှ T. gondii tachyzoites (RH strain) ကို ရိတ်သိမ်းခဲ့ပါသည်။Tachyzoites ကို PBS ဖြင့် သုံးကြိမ်ဆေးကြောပြီး 40% Percoll (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) 43 တွင် centrifugation ဖြင့် သန့်စင်ခဲ့သည်။ME49 ၏ tachyzoites ကိုရရှိရန်၊ BALB/c ကြွက်များကို တစ်သျှူးအရည်အိတ် 20 ဖြင့် အတွင်းပိုင်းအတွင်းထိုးသွင်းပြီး ရောဂါပိုးကူးစက်ပြီးနောက် (PI) ပြီးနောက် 6-8 ရက်မြောက်နေ့တွင် ဝမ်းဗိုက်ကိုဆေးကြောခြင်းဖြင့် အလုံးများအတွင်း tachyzoite အသွင်ပြောင်းခြင်းကို စုဆောင်းခဲ့သည်။ကြွက်များတွင် PBS ကူးစက်သည်။ME49 tachyzoites များကို 100 μg/ml ပင်နီဆီလင် (Gibco/BRL၊ Grand Island, NY, USA), 100 μg/ml streptomycin (Gibco/BRL) နှင့် 5% သန္ဓေသား တိရစ္ဆာန်သွေးရည်ကြည် (Lonza၊ Walkersville, MD) တို့ဖြင့် ဖြည့်စွက်ထားသော ဆဲလ်များတွင် ကြီးထွားလာခဲ့သည်။ ..၊ USA) 37°C နှင့် 5% ကာဗွန်ဒိုင်အောက်ဆိုဒ်။Vero ဆဲလ်များတွင် စိုက်ပျိုးပြီးနောက်၊ ME49 tachyzoites များကို 25 gauge needle မှတဆင့် နှစ်ကြိမ်၊ ထို့နောက် အပျက်အစီးများနှင့် ဆဲလ်များကို ဖယ်ရှားရန်အတွက် 5 µm filter မှတဆင့် ဖြတ်သန်းခဲ့သည်။ဆေးကြောပြီးနောက်၊ tachyzoites များကို PBS44 တွင် ပြန်လည်ရပ်ဆိုင်းခဲ့သည်။Toxoplasma gondii strain ME49 ၏ တစ်သျှူးအကြည်အိတ်များကို ရောဂါပိုးကူးစက်ခံထားရသော C57BL/6 ကြွက်များ၏ ဦးနှောက်မှခွဲထုတ်ထားသော အဆီအိတ်များ (Orient Bio Animal Center, Seongnam, Korea) ၏ အတွင်းသားတွင်းထိုးဆေးဖြင့် ထိန်းသိမ်းထားသည်။ME49 ကူးစက်ခံထားရသော ကြွက်များ၏ ဦးနှောက်များကို PI ၏ ၃ လအကြာတွင် ရိတ်သိမ်းပြီး အသဲများကိုခွဲထုတ်ရန်အတွက် အဏုကြည့်မှန်ဘီလူးအောက်တွင် နုတ်နုတ်စဉ်းထားသည်။ရောဂါပိုးရှိသောကြွက်များကို ဆိုးလ်အမျိုးသားတက္ကသိုလ်ဆေးကျောင်းတွင် အထူးရောဂါပိုးကင်းစင်သောအခြေအနေများ (SPF) အောက်တွင် ထားရှိခဲ့သည်။
စုစုပေါင်း RNA ကို BV2 မှရရှိသော exosomes၊ BV2 ဆဲလ်များနှင့် တစ်ရှူးများမှ miRNeasy Mini Kit (Qiagen၊ Hilden, Germany) ကိုအသုံးပြု၍ elution အဆင့်အတွက် ပေါက်ဖွားသည့်အချိန်အပါအဝင် ထုတ်လုပ်သူ၏ညွှန်ကြားချက်အတိုင်း ထုတ်ယူခဲ့သည်။RNA အာရုံစူးစိုက်မှုကို NanoDrop 2000 spectrophotometer တွင် ဆုံးဖြတ်ခဲ့သည်။RNA microarrays များ၏ အရည်အသွေးကို Agilent 2100 bioanalyzer (Agilent Technologies, Amstelveen, the Netherlands) အသုံးပြု၍ အကဲဖြတ်ခဲ့သည်။
10% exosome-poor FBS ပါသော DMEM ကို 100,000g တွင် 16 နာရီကြာ 4°C တွင် ultracentrifugation ဖြင့် ပြင်ဆင်ပြီး 0.22 µm filter (Nalgene, Rochester, NY, USA) ဖြင့် စစ်ထုတ်ထားပါသည်။BV2 ဆဲလ်များဖြစ်သော 5 × 105 ကို DMEM တွင် 10% exosome-ကုန်သွားသော FBS နှင့် 37°C နှင့် 5% CO2 တွင် ပဋိဇီဝဆေး 1% တို့ပါရှိသော DMEM တွင် မွေးမြူထားပါသည်။ပေါက်ဖွားပြီးနောက် 24 နာရီကြာပြီးနောက်၊ RH သို့မဟုတ် ME49 (MOI = 10) ၏ tachyzoites များကို ဆဲလ်များထဲသို့ ပေါင်းထည့်ခဲ့ပြီး တစ်နာရီအတွင်း မကျူးကျော်နိုင်သော ကပ်ပါးပိုးများကို ဖယ်ရှားကာ DMEM ဖြင့် ပြန်လည်ဖြည့်သွင်းခဲ့သည်။BV2 ဆဲလ်များမှ Exosomes များကို မွမ်းမံထားသော differential centrifugation ဖြင့် သီးခြားခွဲထုတ်ခြင်းဖြစ်ပြီး၊ အသုံးအများဆုံးနည်းလမ်းဖြစ်သည်။RNA သို့မဟုတ် ပရိုတင်းဓာတ်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအတွက် 300 µl PBS တွင် exosome pellet အား ပြန်လည်ရပ်ဆိုင်းပါ။သီးခြားခွဲထုတ်ထားသော exosomes များ၏ အာရုံစူးစိုက်မှုကို BCA ပရိုတင်းစမ်းသပ်ကိရိယာ (Pierce, Rockford, IL, USA) နှင့် NanoDrop 2000 spectrophotometer တို့ကို အသုံးပြု၍ ဆုံးဖြတ်ခဲ့သည်။
BV2 ဆဲလ်များမှ precipitates သို့မဟုတ် BV2 မှရရှိသော exosomes များကို PRO-PREP™ ပရိုတင်းထုတ်ယူမှုဖြေရှင်းချက် (iNtRon Biotechnology၊ Seongnam၊ Korea) တွင် ရောနှောပြီး Coomassie တောက်ပသောအပြာရောင်စွန်းထင်းနေသော 10% SDS polyacrylamide gels များပေါ်သို့ ပရိုတင်းများ တင်ဆောင်ခဲ့သည်။ထို့အပြင်၊ ပရိုတင်းများကို PVDF အမြှေးပါးများသို့ 2 နာရီကြာလွှဲပြောင်းခဲ့သည်။အနောက်တိုင်း blots များကို exosomal အမှတ်အသားအဖြစ် Alix ပဋိပစ္စည်း (Cell Signaling Technology၊ Beverly၊ MA၊ USA) ကို အသုံးပြု၍ အတည်ပြုခဲ့သည်။HRP-conjugated goat anti- mouse IgG (H+L) (Bethyl Laboratories, Montgomery, TX, USA) နှင့် LAS-1000 plus luminescent image analyzer (Fuji Photographic Film, Tokyo, Japan) ကို ဒုတိယ ပဋိပစ္စည်းအဖြစ် အသုံးပြုခဲ့သည်။.Exosomes များ၏ အရွယ်အစားနှင့် ပုံသဏ္ဍာန်ကို လေ့လာရန်အတွက် Transmission electron microscopy ကို ပြုလုပ်ခဲ့ပါသည်။BV2 ဆဲလ်များမှ သီးခြားခွဲထုတ်ထားသော Exosomes (6.40 µg/µl) ကို ကာဗွန်ဖုံးထားသော ကွက်ကွက်များပေါ်တွင် ပြင်ဆင်ပြီး 1 မိနစ်ကြာ 2% uranyl acetate ဖြင့် အပျက်သဘောဆောင်သော စွန်းထင်းခဲ့သည်။ပြင်ဆင်ထားသည့်နမူနာများကို ES1000W Erlangshen CCD ကင်မရာ (Gatan, Pleasanton, CA, USA) တပ်ဆင်ထားသော JEOL 1200-EX II (Tokyo, Japan) ကို အသုံးပြု၍ အရှိန်မြှင့်ဗို့အား 80 kV တွင် လေ့လာတွေ့ရှိခဲ့သည်။
BV2 မှရရှိသော exosomes များသည် PKH26 Red Fluorescent Linker Kit (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) ကို အခန်းအပူချိန်တွင် 15 မိနစ်ကြာ စွန်းထင်းခဲ့သည်။PKH26-တံဆိပ်တပ်ထားသော exosomes (အနီရောင်) သို့မဟုတ် အနုတ်လက္ခဏာထိန်းချုပ်မှုအဖြစ် exosomes မရှိသော 2×105 ဆဲလ်များ၊ 2×105 ဆဲလ်များကို 37°C တွင် 5% CO2 incubator တွင် 24 နာရီကြာ ပေါက်ဖွားခဲ့သည်။U87 ဆဲလ်နျူကလိယကို DAPI (အပြာရောင်) ဖြင့် စွန်းထင်းခဲ့ပြီး U87 ဆဲလ်များကို 4°C တွင် 15 မိနစ်ကြာ Paraformaldehyde 4% ဖြင့် ပြုပြင်ပြီး Leica TCS SP8 STED CW confocal microscope စနစ် (Leica Microsystems, Mannheim, Germany) တွင် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခဲ့သည်။မြင်နိုင်သော။
cDNA ကို Mir-X siRNA ပထမကြိုးမျှင်ပေါင်းစပ်ခြင်းနှင့် SYBR qRT-PCR အစုံ (Takara Bio Inc., Shiga, Japan) ကို အသုံးပြု၍ siRNA မှ ပေါင်းစပ်ပေါင်းစပ်ထားပါသည်။Primer နှင့် SYBR Premix တို့ဖြင့် ရောစပ်ထားသော နမူနာများကို အသုံးပြု၍ iQ5 အစစ်အမှန်အချိန် PCR ထောက်လှမ်းမှုစနစ် (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) ကို အသုံးပြု၍ အချိန်နှင့်တပြေးညီ ပမာဏ PCR ကို လုပ်ဆောင်ခဲ့သည်။DNA သည် 95°C တွင် 15 s တွင် 95°C တွင် denaturation လည်ပတ်မှု 40 ပတ်အတွက် ချဲ့ထွင်ပြီး 60°C တွင် 60s ကြာအောင် ပေါင်းထားသည်။PCR တုံ့ပြန်မှုတစ်ခုစီမှဒေတာကို iQ™5 optical system software (Bio-Rad) ၏ဒေတာခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှု module ကိုအသုံးပြု၍ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခဲ့သည်။ရွေးချယ်ထားသော ပစ်မှတ်မျိုးဗီဇများနှင့် β-actin/siRNA (နှင့် U6) အကြား ဆက်စပ်ပြောင်းလဲမှုများကို စံမျဉ်းကွေးနည်းလမ်းကို အသုံးပြု၍ တွက်ချက်ခဲ့သည်။အသုံးပြုထားသော primer sequence များကို ဇယား 1 တွင် ပြထားသည်။
3 x 104 U87 glioma ဆဲလ်များကို 96 တွင်းပြားများတွင် အစေ့ထုတ်ပြီး BV2 (50 μg/mL) သို့မဟုတ် BV2 (50 μg/mL) မှ ဆင်းသက်လာသော Toxoplasma ပိုးဝင်သော exosomes များနှင့် ရောနှောပြီး BV2 (50 μg/mL) မှ 12, 36 နာရီအထိ ထိန်းချုပ်ထားသည်။ .ဆဲလ်ပွားနှုန်းကို ဆဲလ်ရေတွက်ခြင်း Kit-8 (Dojindo၊ Kumamoto၊ Japan) (နောက်ဆက်တွဲပုံများ S1-S3) 46 ဖြင့် ဆုံးဖြတ်ခဲ့သည်။
အသက် ၅ ပတ်အရွယ် BALB/c ဝတ်လစ်စားလစ် ကြွက်များကို Orient Bio (Seongnam-si၊ South Korea) မှ ဝယ်ယူခဲ့ပြီး အခန်းအပူချိန် (22±2°C) နှင့် စိုထိုင်းဆ (45±15°C) တွင် ပိုးမွှားလှောင်အိမ်များတွင် သီးသန့်ထားရှိခဲ့သည်။အခန်းအပူချိန် (22±2°C) နှင့် စိုထိုင်းဆ (45±15%) တွင် %)။12 နာရီအလင်းစက်ဝိုင်းနှင့် 12 နာရီအမှောင်စက်ဝိုင်းကို SPF (ဆိုးလ်အမျိုးသားတက္ကသိုလ်ဆေးပညာကျောင်းတိရစ္ဆာန်စင်တာ) အောက်တွင်လုပ်ဆောင်ခဲ့သည်။ကြွက်များကို ကျပန်းအားဖြင့် ကြွက် ၅ ကောင်စီတွင် အုပ်စုသုံးစုခွဲပြီး အုပ်စုအားလုံးကို 1 x 107 U87 glioma ဆဲလ်များပါရှိသော PBS ၏ 400 ml နှင့် ကြီးထွားမှုဆိုင်ရာအချက် လျှော့နည်းသော BD Matrigel™ (BD Science, Miami, FL, USA)။အကျိတ်ဆေးထိုးပြီးနောက် ခြောက်ရက်အကြာတွင် BV2 ဆဲလ်များမှ ဆင်းသက်လာသော exosome 200 mg (Toxoplasma infection) သည် အကျိတ်နေရာသို့ ထိုးသွင်းခဲ့သည်။အကျိတ်ကူးစက်ပြီး နှစ်ဆယ့်နှစ်ရက်အကြာတွင် အုပ်စုတစ်ခုစီရှိ ကြွက်များ၏ အကျိတ်အရွယ်အစားကို တစ်ပတ်လျှင် သုံးကြိမ် ကန့်လန့်ဖြတ်ဖြင့် တိုင်းတာခဲ့ပြီး အကျိတ်ပမာဏကို ဖော်မြူလာဖြင့် တွက်ချက်ခဲ့သည်- 0.5×(အကျယ်)×2×အလျား။
miRCURYTM LNA miRNA အခင်းအကျင်းကို အသုံးပြု၍ microRNA ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုတွင် 7th မျိုးဆက်တွင်၊ mmu နှင့် rno အခင်းအကျင်းများ (EXIQON၊ Vedbaek၊ Denmark) သည် လူ 3100၊ ကြွက်နှင့် ကြွက် miRNA ဖမ်းယူရေးဆိုင်ရာ စူးစမ်းလေ့လာမှုများကြားတွင် ကောင်းမွန်သောသွင်ပြင်လက္ခဏာရှိသော ကြွက် 1119 ခုကို ဖုံးအုပ်ထားသည်။ဤလုပ်ထုံးလုပ်နည်းအတွင်း၊ စုစုပေါင်း RNA ၏ 250 မှ 1000 ng ကို 5′-phosphate မှဖယ်ထုတ်ပြီး ခြေသလုံးကြွက်သားအူလမ်းကြောင်း alkaline phosphatase နှင့် Hy3 အစိမ်းရောင်ချောင်းဆိုးဆေးဖြင့်တံဆိပ်ကပ်ခြင်းဖြင့် ဖယ်ရှားခဲ့သည်။ထို့နောက် တံဆိပ်တပ်ထားသောနမူနာများကို ပေါင်းစပ်ထည့်သွင်းထားသော အခန်းအစုံ (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA) နှင့် ပေါင်းစပ်ထည့်သွင်းထားသော ဆလိုက်ကိရိယာ (Agilent Technologies) ကို အသုံးပြု၍ ပေါင်းစပ်ပေါင်းစပ်ထားပါသည်။56°C တွင် 16 နာရီကြာ Hybridization ပြုလုပ်ပြီးနောက် ထုတ်လုပ်သူ၏ အကြံပြုချက်နှင့်အညီ microarray များကို ဆေးကြောခဲ့သည်။ထို့နောက် စီမံဆောင်ရွက်ထားသော မိုက်ခရိုအာရေးဆလိုက်များကို Agilent G2565CA မိုက်ခရိုအာရေးစကင်နာစနစ် (Agilent Technologies) သုံးပြီး စကင်န်ဖတ်သည်။စကင်န်ဖတ်ထားသောပုံများကို Agilent Feature Extraction software ဗားရှင်း 10.7.3.1 (Agilent Technologies) ကို အသုံးပြု၍ တင်သွင်းပြီး ပုံတစ်ပုံချင်းစီ၏ အလင်းရောင်ပြင်းအားကို ပြုပြင်ထားသော Exiqon ပရိုတိုကော၏ သက်ဆိုင်ရာ GAL ဖိုင်ကို အသုံးပြု၍ ပမာဏကို တိုင်းတာပါသည်။လက်ရှိလေ့လာမှုအတွက် Microarray ဒေတာကို ချိတ်ဆက်မှုနံပါတ် GPL32397 အောက်ရှိ GEO ဒေတာဘေ့စ်တွင် အပ်နှံထားသည်။
Toxoplasma ကူးစက်ခံထားရသော RH သို့မဟုတ် ME49 မျိုးကွဲများ၏ microglia အတွင်းရှိ ရင့်ကျက်သော exosomal miRNA များ၏ ဖော်ပြချက်ပရိုဖိုင်များကို ကွန်ရက်ကိရိယာအမျိုးမျိုးဖြင့် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခဲ့သည်။အကျိတ်ဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှုနှင့်ဆက်စပ်သော miRNA များကို miRWalk2.0 (http://mirwalk.umm.uni-heidelberg.de) ကိုအသုံးပြု၍ ရှာဖွေတွေ့ရှိခဲ့ပြီး 8.0 ထက်သာလွန်သော ပုံမှန်အချက်ပြမှုပြင်းထန်မှု (log2) ဖြင့် စစ်ထုတ်ပါသည်။miRNA များကြားတွင် ကွဲပြားစွာဖော်ပြသော miRNA များသည် RH သို့မဟုတ် ME49 ဗိုင်းရပ်စ်ကူးစက်ခံရသော T. gondii မှပြောင်းလဲလာသော miRNA များ၏ filter ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းဖြင့် ပြောင်းလဲလာသော 1.5 ဆကျော်ဖြစ်ကြောင်း တွေ့ရှိရသည်။
ဆဲလ်များကို Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) ကိုအသုံးပြု၍ opti-MEM (Gibco, Carlsbad, CA, USA) တွင် ရေတွင်းခြောက်တွင်း (၃ x ၁၀၅ ဆဲလ်/ရေတွင်း) တွင် မျိုးစေ့ချထားသည်။ကူးစက်ခံရသော ဆဲလ်များကို 6 နာရီကြာ မွေးမြူပြီးနောက် ကြားခံအား လတ်ဆတ်သော ပြီးပြည့်စုံသော အလတ်စားအဖြစ်သို့ ပြောင်းလဲခဲ့သည်။ဆဲလ်များကို ကူးပြောင်းပြီးနောက် 24 နာရီအတွင်း ရိတ်သိမ်းသည်။
စာရင်းအင်းခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းကို အဓိကအားဖြင့် ကျောင်းသား၏ t-test ကို Excel ဆော့ဖ်ဝဲလ် (Microsoft၊ Washington, DC, USA) ဖြင့် ပြုလုပ်ခဲ့သည်။စမ်းသပ်တိရစ္ဆာန်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းအတွက်၊ နှစ်လမ်းသွား ANOVA ကို Prism 3.0 ဆော့ဖ်ဝဲ (GraphPad Software, La Jolla, CA, USA) အသုံးပြု၍ လုပ်ဆောင်ခဲ့သည်။ P-တန်ဖိုးများ < 0.05 ကို ကိန်းဂဏန်းအရ သိသာထင်ရှားစွာ သတ်မှတ်သည်။ P-တန်ဖိုးများ < 0.05 ကို ကိန်းဂဏန်းအရ သိသာထင်ရှားစွာ သတ်မှတ်သည်။ Значения P < 0,05 считались статистически значимыми။ P တန်ဖိုးများ <0.05 ကို ကိန်းဂဏန်းအရ သိသာထင်ရှားစွာ သတ်မှတ်ခဲ့ကြသည်။ P 值< 0.05 被认为具有统计学意义။ P 值< 0.05 Значения P < 0,05 считались статистически значимыми။ P တန်ဖိုးများ <0.05 ကို ကိန်းဂဏန်းအရ သိသာထင်ရှားစွာ သတ်မှတ်ခဲ့ကြသည်။
ဤလေ့လာမှုတွင်အသုံးပြုသည့် စမ်းသပ်ဆဲပရိုတိုကောအားလုံးကို ဆိုးလ်အမျိုးသားတက္ကသိုလ်ဆေးကျောင်း၏ Institutional Review Board (IRB နံပါတ် SNU-150715-2) မှ အတည်ပြုခဲ့သည်။
The data used in this study are available upon reasonable request from the first author (BK Jung; mulddang@snu.ac.kr). And the microarray data for the current study is deposited in the GEO database under registration number GPL32397.
Furley, J. et al.2018 ခုနှစ်တွင် ကမ္ဘာလုံးဆိုင်ရာ ကင်ဆာဖြစ်ပွားမှုနှင့် သေဆုံးမှု ခန့်မှန်းချက်- GLOBOCAN အရင်းအမြစ်များနှင့် နည်းလမ်းများ။စကားပြန်။J. Ruck 144၊ 1941–1953 (2019)။
Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS ဦးနှောက်အကျိတ်များ၏ အန္တရာယ်အချက်များနှင့် ၎င်းတို့၏ ကုထုံးဆိုင်ရာ လုပ်ဆောင်ချက်များကို ထိုးထွင်းသိမြင်ခြင်း။ Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS ဦးနှောက်အကျိတ်များ၏ အန္တရာယ်အချက်များနှင့် ၎င်းတို့၏ ကုထုံးဆိုင်ရာ လုပ်ဆောင်ချက်များကို ထိုးထွင်းသိမြင်ခြင်း။Rashid, S., Rehman, K. နှင့် Akash, MS ဦးနှောက်အကျိတ်များအတွက် အန္တရာယ်အချက်များနှင့် အဓိက ကုထုံးဆိုင်ရာ စွက်ဖက်မှုများကို ပြန်လည်သုံးသပ်ခြင်း။ Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS 深入了解脑肿瘤的危险因素及其治疗干预措施。 Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS သည် ဦးနှောက်အကျိတ်အန္တရာယ်အချက်များနှင့် ကုထုံးဆိုင်ရာဝင်ရောက်စွက်ဖက်မှုများကို နက်ရှိုင်းစွာနားလည်ခြင်း။Rashid, S., Rehman, K. နှင့် Akash, MS ဦးနှောက်အကျိတ်များအတွက် အန္တရာယ်အချက်များနှင့် အဓိက ကုထုံးဆိုင်ရာ စွက်ဖက်မှုများကို ပြန်လည်သုံးသပ်ခြင်း။ဇီဝဆေးသိပ္ပံ။ဆေးဆရာ။143၊ 112119 (2021)။
Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. လူ့ အစာခြေလမ်းကြောင်းနှင့် အမျိုးသမီး လိင်အင်္ဂါ ကင်ဆာများတွင် ဘက်တီးရီးယား-ဗိုင်းရပ်စ် အပြန်အလှန် တုံ့ပြန်မှုများ- ကူးစက်ရောဂါနှင့် ဓာတ်ခွဲခန်းဆိုင်ရာ အထောက်အထား အကျဉ်းချုပ်။ Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. လူ့ အစာခြေလမ်းကြောင်းနှင့် အမျိုးသမီး လိင်အင်္ဂါ ကင်ဆာများတွင် ဘက်တီးရီးယား-ဗိုင်းရပ်စ် အပြန်အလှန် တုံ့ပြန်မှုများ- ကူးစက်ရောဂါနှင့် ဓာတ်ခွဲခန်းဆိုင်ရာ အထောက်အထား အကျဉ်းချုပ်။Kato I., Zhang J. နှင့် Sun J. လူ့အစာအိမ်နှင့်အူလမ်းကြောင်းကင်ဆာနှင့် အမျိုးသမီးအင်္ဂါလမ်းကြောင်းကင်ဆာတွင် ဘက်တီးရီးယား-ဗိုင်းရပ်စ် အပြန်အလှန်တုံ့ပြန်မှုများ- ကူးစက်ရောဂါနှင့် ဓာတ်ခွဲခန်းဆိုင်ရာ အချက်အလက်အကျဉ်းချုပ်။ Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. 人类口腔消化道癌和女性生殖道癌中的细菌-病毒相互作用：慍孻菌病毒相互作用：慍孻行用 Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. လူ့ပါးစပ်တွင်း အစာခြေခြင်းနှင့် အမျိုးသမီး မျိုးပွားလမ်းကြောင်းတွင် ဘက်တီးရီးယား-ဗိုင်းရပ်စ် အပြန်အလှန် သက်ရောက်မှု- လူကြိုက်များသော ရောဂါသိပ္ပံနှင့် ဓာတ်ခွဲခန်းဆိုင်ရာ အထောက်အထားများ၏ အကျဉ်းချုပ်။Kato I.၊ Zhang J. နှင့် Sun J. လူ့အစာအိမ်နှင့်အူလမ်းကြောင်းကင်ဆာနှင့် အမျိုးသမီးလိင်အင်္ဂါကင်ဆာတို့တွင် ဘက်တီးရီးယား-ဗိုင်းရပ်စ် အပြန်အလှန်တုံ့ပြန်မှုများ- ကူးစက်ရောဂါနှင့် ဓာတ်ခွဲခန်းဒေတာအကျဉ်းချုပ်။ကင်ဆာ ၁၄၊ ၄၂၅ (၂၀၂၂)။
Magon၊ KL & Parish၊ JL ရောဂါပိုးကူးစက်မှုမှကင်ဆာအထိ- DNA အကျိတ်ဗိုင်းရပ်စ်များသည် လက်ခံထားသောဆဲလ်ဗဟိုကာဗွန်နှင့် lipid ဇီဝြဖစ်ပျက်မှုကို မည်သို့ပြောင်းလဲစေသနည်း။ Magon၊ KL & Parish၊ JL ရောဂါပိုးကူးစက်ခြင်းမှ ကင်ဆာရောဂါအထိ- DNA အကျိတ်ဗိုင်းရပ်စ်များသည် လက်ခံထားသောဆဲလ်ဗဟိုကာဗွန်နှင့် lipid ဇီဝြဖစ်ပျက်မှုကို မည်သို့ပြောင်းလဲစေသနည်း။Mahon၊ KL နှင့် Parish၊ JL Fire သည် ကင်ဆာသို့ကူးစက်ခြင်း- DNA-အခြေခံအကျိတ်ဗိုင်းရပ်စ်များသည် လက်ခံထားသောဆဲလ်ဗဟိုကာဗွန်နှင့် lipid ဇီဝြဖစ်ပျက်မှုကို ပြောင်းလဲစေသည်။ Magon၊ KL & Parish၊ JL 从感染到癌症：DNA 肿瘤病毒如何改变宿主细胞的中心碳和脂质代谢။ Magon၊ KL & Parish၊ JL ပိုးကူးစက်မှုမှ ကင်ဆာရောဂါအထိ- DNA အကျိတ်ဗိုင်းရပ်စ်များသည် လက်ခံထားသည့် ဆဲလ်ဗဟိုကာဗွန်နှင့် lipid ဇီဝြဖစ်ပျက်မှုကို ပြောင်းလဲစေသည်။Mahon၊ KL နှင့် Parish၊ JL သည် ကင်ဆာကို ကူးစက်စေသည်- DNA အကျိတ်ဗိုင်းရပ်စ်များသည် လက်ခံထားသည့်ဆဲလ်များရှိ ဗဟိုကာဗွန်နှင့် lipid ဇီဝြဖစ်ပျက်မှုကို ပြောင်းလဲစေသည်။ဇီဝဗေဒဖွင့်။11၊ 210004 (2021)။
Correia da Costa၊ JM et al။schistosomes နှင့် အသည်း fluke နှင့် helminth-ဆက်စပ်သောကင်ဆာများ၏ Catechol estrogen များ။ရှေ့။အတွင်းပူ။5, 444 (2014)။